收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Ik6基因在急性淋巴细胞白血病中的表达及其功能的初步研究

周芬  
【摘要】:急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)是儿童恶性血液病中最常见的疾病,由于化疗方案的不断完善,其治愈率目前已高达80%左右,但仍有部分患儿对化疗不敏感或复发,预后不佳。临床研究表明,复发不仅仅出现于高危组,还会出现在低危或中危组的患儿中,这种现象无疑对当前的危险度分级标准提出了严峻的挑战。因此,不断发掘新的预后因素、完善分级标准、给予患儿针对性的化疗对提高ALL患儿的预后有重要意义。 Ik6 (Ikaros isoform 6, Ik6)是Ikaros基因的一个显性负相亚型,由Ikaros基因IKZF1 (Ikaros family zinc finger 1)的外显子3-6缺失形成,是IKZF1缺失的主要形式之一。Ik6能够抑制Ikaros发挥正常的抑制血液系统肿瘤的功能,并且是Ikaros家族中最强的抑制因子。国外研究指出,Ik6在BCR/ABL阳性的ALL中高频出现,且与ALL预后不佳的临床因素密切相关,如原始细胞比例过高、异常细胞遗传学改变、化疗不敏感、难以达到完全缓解等。Ik6还参与细胞的凋亡途径,保护细胞免受外界刺激导致的凋亡。据此,我们推测Ik6可能在急性淋巴细胞白血病的进展中起到一定的作用。 慢病毒载体转染法是将外源基因转入悬浮细胞的首选方法,其转导效率高、基因表达稳定持久且细胞毒性较低,其介导的基因过表达或沉默是研究基因功能的经典方法。 本研究检测了Ik6在儿童ALL患儿骨髓细胞中的表达,并分析其与临床特征的关系;通过慢病毒介导的基因过表达,探索性研究了Ik6基因对ALL细胞株Nalm-6生长、侵袭及化疗敏感性的影响,旨在进一步认识Ik6基因在ALL中的作用与意义。 第一部分 Ik6基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义 目的:探讨IKZF1及其显性负相基因Ik6在儿童急性淋巴细胞白血病患者中的表达及其临床意义,以初步了解Ik6在ALL发生发展中的作用。 方法:应用巢式RT-PCR方法检测88例初诊ALL患儿骨髓单个核细胞中IKZF1基因的表达情况;凝胶回收DNA产物片段并对目的基因测序鉴定;应用多重RT-PCR方法检测ALL融合基因的表达;分析Ik6基因的表达与患者临床特征的关系。 结果:最常见的IKZF1亚型是Ik2/3(73.86%),其次是Ikl(42.05%)和Ik4(32.95%)。急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)和急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中Ik6基因的阳性表达率分别是11.43%(8/70)和5.56%(1/18)。在8例Ik6阳性表达的B-ALL患者中,3例BCR/ABL阳性,1例HOX11阳性,4例融合基因表达阴性,其中Ik6的表达与BCR/ABL目关(P0.01)。分析Ik6与患者临床特征的关系发现,Ik6与年龄、白细胞计数、危险度分级及其他遗传学特征无显著相关性(P0.05),但与诱导化疗后的微小残留病(minimal residual disease, MRD)高水平相关(P0.01)。 结论:Ik6在部分ALL患者中阳性表达,可作为临床预后评估的一项独立指标,可能作为初诊时判断为高危白血病患儿的临床指标之一。 第二部分 Ik6过表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定 目的:构建含有人Ik6基因的慢病毒表达载体pHR-CSIGW-Ik6,病毒包装后获得由绿色荧光蛋白标记的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞使之表达Ik6蛋白,为研究Ik6在白血病中的作用打下基础。 方法:通过RT-PCR方法从人急性淋巴细胞白血病细胞株Sup-B15获得Ik6基因,将其插入pEASY-T质粒上构建重组表达载体pEASY-Ik6,经XhoⅠ、BamHⅠ双酶切后,Ik6片段与慢病毒表达载体pHR-SIN CSIGW连接重组为pHR-CSIGW-Ik6。慢病毒系统在293T细胞中进行病毒包装和滴度测定。慢病毒感染人急性淋巴细胞白血病细胞株Nalm-6后,采用流式细胞术、实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测Ik6在Nalm-6细胞中的表达效果。 结果:成功构建了pEASY-Ik6和pHR-CSIGW-Ik6载体,经PCR和测序鉴定结果与Ik6基因序列完全一致。在293T细胞中进行病毒包装获得的病毒滴度为2×109TU/ml,满足实验要求。当感染倍数(multiple of infection,MOI)为50时,Nalm-6细胞的感染率可达到80%以上。感染后的Nalm-6细胞,Ik6在转录和蛋白水平表达明显上调(P0.01)。 结论:Ik6过表达载体构建成功,感染效率高、基因表达稳定,为进一步研究Ik6在白血病中的作用奠定了基础。 第三部分 Ik6过表达对急性淋巴细胞白血病细胞Nalm-6生物学特性的影响 目的:研究Ik6过表达对急性淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。 方法:采用CCK-8法和集落形成法检测对照组Nalm-6细胞、空载体转染组Nalm-6-mock细胞和Ik6载体转染组Nalm-6-Ik6细胞的增殖和集落形成;CCK-8法检测细胞对化疗药物长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)、门冬酰胺酶(L-Asp)和地塞米松(Dex)的敏感性;采用Annexin-V/FITC PI双染法及流式细胞术检测细胞的凋亡;实时定量PCR和Western Blot法检测化疗药物作用于Nalm-6-Ik6后Ik6的表达。 结果:1.慢病毒介导Ik6基因过表达可显著提高Nalm-6细胞的增殖(P0.05)及细胞克隆的形成(P0.01);2.相比较于Nalm-6-mock细胞,Nalm-6-Ik6细胞对诱导缓解治疗药物VCR、DNR和L-Asp的抵抗增加,24小时的工C5。值分别为34.94 ng/ml (vs.20.51 ng/ml)、12.25 ng/ml (vs.1.89 ng/ml)和2.37 IU/ml (vs.0.36 IU/ml) (P0.05); 3. Nalm-6-mock细胞经VCR、DNR和L-Asp诱导后凋亡显著增加(P0.05),而Nalm-6-Ik6无明显改变(P0.05);4.化疗药物VCR、DNR和L-Asp能降低细胞Nalm-6-Ik6中Ik6 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。 结论:Ik6可促进ALL细胞的生长及对化疗药物的抵抗,化疗抵抗的机制复杂,可能与Ik6的抗凋亡作用及本身表达受化疗药物调节相关。 第四部分 Ik6基因过表达对急性淋巴细胞白血病侵袭的影响 目的:探讨Ik6过表达对急性淋巴细胞白血病血管新生及迁移侵袭的影响。 方法:实时定量PCR法检测20例B系ALL及10例正常对照患者骨髓单个核细胞中血管新生相关因子VEGF, Flt-1、PlGF, Ang-1和Ang-2的表达,并分析Ik6与血管新生相关因子表达的关系。实时定量法检测Nalm-6-mock和Nalm-6-Ik6细胞血管新生相关因子的表达;Transwell法检测转染前后Nalm-6细胞的迁移和侵袭力。 结果:血管新生相关因子VEGF、Flt-1、PlGF、Ang-1和Ang-2的mRNA表达:1.ALL组(n=20)的表达明显高于正常对照组(n=10)(P0.01);2.Ik6+ALL组(n=8)和Ik6-ALL组(n=12)的表达无差异(P0.05);3.Ik6单独表达的ALL组(n=5)和其他组(n=15)相比较,表达上调但差异无统计学意义(P0.05);4. Nalm-6-Ik6细胞和Nalm-6-mock细胞的表达无差异(P0.05),Spearman相关分析显示Ik6与血管新生相关因子表达无相关性(P0.05)。Transwell实验也显示转染前后Nalm-6细胞的迁移和侵袭力无明显变化(P0.05)。 结论:Ik6可能不参与急性淋巴细胞白血病的血管新生及转移和侵袭。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 靳雁斌;吴燕;王晓文;吴海涛;景孝堂;刘毅;范文红;范明;;人Slitrk1基因对PC12细胞增殖和分化的影响[J];解放军医学杂志;2006年11期
2 曹仁贤;田利娜;文芳;刘星;钟警;文格波;;过表达S100A13基因对甲状腺癌TT细胞增殖特性的影响[J];癌症;2008年08期
3 苏新良;任国胜;王小毅;谭金祥;;HYAL1基因过表达对乳腺癌细胞迁移能力和血管生成能力及增殖的影响[J];第三军医大学学报;2008年15期
4 谭宁;覃文新;万晓桢;余艳军;王植柔;顾健人;;LASS2基因抑制HCCLM3肝癌细胞的转移[J];肿瘤;2007年05期
5 刘洋;杨红旺;孟雁;;CDK11p58基因过表达抑制INS-1细胞的增殖[J];世界华人消化杂志;2009年09期
6 王林;王慧;叶珏;宋莉;孟宪敏;;腺病毒过表达TNNI3K基因对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度的影响[J];中国分子心脏病学杂志;2011年02期
7 杨根岭;罗文萍;刘真真;谭冬梅;王应雄;谭毅;;MK基因对小鼠子宫基质细胞蜕膜化进程的影响[J];生物化学与生物物理进展;2011年08期
8 郑建勇,李开宗,王为忠,李江;p27~(KIP1)基因过表达诱导HCC-9204细胞在G_1期停滞并导致细胞凋亡[J];中华普通外科杂志;2002年09期
9 李颖;朱彬;王跃锜;华慧;何垠波;王正荣;;Period2基因对大鼠神经胶质瘤放射敏感性的影响[J];四川生理科学杂志;2006年02期
10 张莉莉;杨柳;;葡萄糖调节蛋白75基因对H_2O_2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤有保护作用[J];南京医科大学学报(自然科学版);2007年12期
11 陈钢;张正治;;Synoviolin基因慢病毒表达载体的构建及对滑膜细胞增殖的影响[J];局解手术学杂志;2009年06期
12 杨洪宽;毛峰;万锋;张华楸;王宝峰;郭东生;雷霆;;LRIG3基因对脑胶质瘤细胞系U87和U251的细胞周期、侵袭性和凋亡的影响[J];中国临床神经外科杂志;2011年04期
13 张锐;许磊波;岳秀敬;余先焕;刘超;;Bmi1基因对大鼠成体肝干细胞的体外增殖能力影响的研究[J];中国普通外科杂志;2010年07期
14 Bernard Boazma;;单纯疱疹病毒的基本结构和功能研究的最新进展[J];国外医学情报;1982年03期
15 陈德民;;人类性格可以遗传[J];科学养生;1996年06期
16 杜均祥,王嵘,吴向华,万大方,顾建人;转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用[J];肿瘤防治研究;2004年06期
17 许杰;刘智胜;;癫癎和睡眠[J];国际儿科学杂志;2007年06期
18 冯志华;;基因决定社交兴趣[J];新世纪周刊;2009年06期
19 陈德民;;科学家首次证实人类性格可以遗传[J];健康博览;1996年05期
20 崔龙;胞嘧啶脱氨酶基因对胃癌细胞的杀伤作用[J];第二军医大学学报;1999年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周伟强;张学;宋今丹;;DOC-1R基因对细胞周期影响的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
2 郭冬梅;李丽珍;马道新;臧绍蕾;戴建建;纪春岩;侯明;;RNA干扰Notchl基因对T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株增殖的影响及其机制[A];第十一届全国血栓与止血学术会议暨血栓栓塞性疾病(血栓与止血)基础与临床研究进展学习班论文摘要汇编及学习班讲义[C];2007年
3 洪伟俊;宁允叶;胥武剑;邵艳;李强;;组蛋白去乙酰化酶5对肺腺癌H1299细胞迁移的影响[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年
4 戢爽;姜怀志;;绵羊妊娠期生殖组织VEGF基因的克隆及其组织表达量的检测[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
5 史忠诚;黄晓义;于旸;张微;江晖;白静;傅松滨;;外源p16抑制肿瘤细胞增殖的研究[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年
6 邵丽丽;单保恩;;转染IL-27基因对人胰腺癌细胞抗肿瘤活性研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
7 云妙英;肖宇红;叶广俊;孙江平;;抑郁和多巴胺D2受体基因对吸烟易感性交互作用的病例对照研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
8 曾昭蕾;冼励坚;;在结肠癌中Bmal1基因对奥沙利铂的作用研究[A];2011年全国时间生物医学学术会议论文集[C];2011年
9 刘芳;程玉峰;;Rb94增强人肺腺癌细胞系A549放射敏感性研究[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
10 吴永恒;周一平;荣新洲;周伟明;任加良;杨磊;姜勇;王静珍;秦清河;;腺病毒介导MKK6b基因对成纤维细胞增生的抑制作用[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周芬;Ik6基因在急性淋巴细胞白血病中的表达及其功能的初步研究[D];华中科技大学;2011年
2 张金玉;牛和鹿IGF-Ⅰ基因可变剪接类型及不同转录子表达规律研究[D];吉林大学;2012年
3 宋亚丽;F10基因对A549细胞凋亡、化疗敏感性及致瘤性的影响[D];南方医科大学;2010年
4 郑岩松;RhoC基因对肝癌侵袭转移的影响[D];中南大学;2003年
5 张国鹏;两种核素报告基因系统用于监测治疗基因VEGF165表达的基础研究[D];华中科技大学;2010年
6 王晓玲;CARASIL家系HTRA1突变基因与血管平滑肌细胞TGF-β信号通路的关系研究[D];第二军医大学;2012年
7 周伟强;DOC-1R基因对细胞增殖周期影响的研究[D];中国医科大学;2003年
8 王长春;番茄Cf-4和Cf-9基因介导的过敏性反应调控及基因沉默技术的研究[D];浙江大学;2005年
9 付军科;nm23-H1基因对肺癌细胞Wnt信号通路调控机制的实验研究[D];四川大学;2004年
10 王晓雷;E1A基因对头颈淋巴结转移性鳞癌的生长抑制和化、放疗增敏作用[D];中国协和医科大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邬匡杰;STC2基因在原发性肝癌中的表达[D];南京医科大学;2011年
2 王蕾;人Rb94基因联合γ射线照射对K150细胞生长影响的体内、外研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 邵盈;人IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞抑制作用的研究[D];天津医科大学;2011年
4 张欣;拟南芥AZI1基因对酿酒酵母生长和蒜薹灰霉菌侵染的抑制作用[D];西北大学;2011年
5 惠捷;上调Twist基因对SW480细胞株体外增殖及侵袭性影响的研究[D];河北医科大学;2011年
6 陈志超;大肠杆菌yigP基因的结构及功能研究[D];华东理工大学;2011年
7 陈熙;干扰Apg-2基因在BaF3-p210及BaF3-p210-T315I中的作用研究[D];重庆医科大学;2012年
8 翟春媛;猪TLR4基因的突变与功能分析[D];东北农业大学;2010年
9 胡珍珍;慢病毒载体介导的ANNEXIN A10瘤内注射对HepG2细胞皮下移植瘤抑制作用的研究[D];南昌大学;2012年
10 占思远;山羊IGFBP家族基因的克隆及其组织表达规律的研究[D];四川农业大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 荆晶;我们与谁交友,基因在冥冥中主宰[N];新华每日电讯;2011年
2 记者 谭大跃 通讯员 刘旭林;华大基因妙手生“猪”“猪坚强”繁衍下一代[N];深圳特区报;2011年
3 廖联明;首个长高基因找到了[N];健康报;2007年
4 卢菁;怕胖可就是管不住嘴,原是基因作怪[N];新华每日电讯;2008年
5 张忠霞;WTX基因与儿童肾癌有关[N];医药经济报;2007年
6 SINEAD;肌肉基因对脂肪贮存过程有很大影响[N];中国高新技术产业导报;2002年
7 耿稚江;美发现肿瘤抑制新基因[N];中国医药报;2007年
8 曹丽君;狂躁抑郁症与FAT基因相关[N];医药经济报;2006年
9 钱铮;癌症基因也有“两面派”[N];健康报;2005年
10 记者 曹丽君 记者 潘治;人类第6号染色体已破译[N];新华每日电讯;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978