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白桦脂酸对人AGS胃腺癌细胞Hiwi和Cyclin B1基因表达的调控作用

杨立靖  
【摘要】:目的:本实验以人胃腺癌AGS细胞为研究对象,观察白桦脂酸对AGS细胞增殖、凋亡及周期的影响,并探讨其分子机制。 方法:用噻唑蓝(MTT)法检测来白桦脂酸对AGS细胞增殖的影响,用AnnexinV-PI双标流式细胞术来检测AGS细胞凋亡率,用Hoechst 33258染色分析AGS细胞发生凋亡后的形态学变化。经白桦脂酸处理后的AGS细胞,其细胞周期的变化经PI染色后用流式细胞仪来检测。Hiwi和Cyclin B1蛋白的变化用单标流式细胞术检测,而其mRNA表达水平的相对高低用逆转录PCR(RT-PCR)来检测。 结果:在体外实验中,白桦脂酸能以时间和剂量依赖方式显著抑制AGS细胞的增殖,其24 h的IC50值为18.25 ug/mL (95%可信区间:15.16-27.31 ug/mL)。当白桦脂酸的浓度达到12 ug/mL以上时,AGS细胞出现明显的凋亡,经Hoechst 33258染色可见典型的凋亡小体。白桦脂酸还能使AGS细胞周期阻滞在G2/M期,而处在S期的细胞数量减少。经白桦脂酸处理24 h的AGS细胞,其Hiwi和Cyclin B1蛋白及m RNA的表达水平均以剂量依赖的方式下调。 结论:Hiwi基因在AGS细胞中高水平异常表达。白桦脂酸在体外实验中,具有抑制AGS细胞增殖,诱导其凋亡并阻滞其于G2/M期的活性作用。而这种作用可能与白桦脂酸能在基因水平上抑制Hiwi及Cyclin B1的表达有关。白桦脂酸强大的抗肿瘤细胞活性使其可能成为一种新的抗胃腺癌肿瘤药物。


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