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缝隙连接在人骨髓间充质干细胞向软骨分化过程中的作用

欧阳柳  
【摘要】:目的研究缝隙连接和缝隙连接蛋白在人骨髓基质干细胞体外向软骨分化过程中的作用。 方法体外培养人骨髓基质干细胞(hMSCs),取第3代细胞,以生长分化因子-5(GDF-5)(100ng/ml)和缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX)(2μmol/L)干预培养,分3个实验组,A:对照组。B:GDF-5组。C:CBX组。MTT法测定甘珀酸对人骨髓基质干细胞增殖的影响,免疫荧光细胞化学法检测软骨细胞特异性Ⅱ型胶原的表达,Western blotting检测Cx43蛋白的表达,阿辛兰染色蛋白多糖,利用激光共聚焦检测荧光并绘制荧光恢复曲线。 结果MTT结果显示2μmol/L浓度甘珀酸对hMSCs的增殖不产生影响,对细胞没有毒性抑制作用;免疫荧光细胞化学染色结果显示CBX能够抑制Ⅱ型胶原蛋白的表达(p 0.05) ;Western blotting结果表明CBX对Cx43蛋白的表达无明显作用;阿辛兰染色结果显示CBX酸抑制分化细胞分泌蛋白多糖基质,共聚焦检测下荧光恢复曲线显示CBX组荧光恢复幅度较其他组降低,差异有显著性意义(p0.05)。 结论GDF-5可以诱导hMSC分化为软骨细胞,Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)在此过程中发挥着重要作用;缝隙连接阻断剂甘珀酸阻断缝隙连接细胞间通讯,但是对Cx43蛋白的表达没有影响。


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