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整合素β1在CD151促HUVEC迁移增殖中的机制研究

许富英  
【摘要】:目的:构建PAAV-CD151-AAA194-196突变体,三质粒钙磷共转染法包装病毒,并转染脐静脉内皮细胞,研究整合素β1在CD151基因促进脐静脉内皮细胞迁移增殖中的机制。 方法:1.质粒的提取和鉴定; 2.三质粒钙磷共转染法包装病毒,并通过斑点杂交法检测重组腺相关病毒滴度; 3.培养HUVEC,并随机分为四组:Control组,GFP组,CD151组和QRD组。用rAAV-GFP、rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196转染HUVEC,并进行以下实验: 3.1通过SRB法检测CD151基因对脐静脉内皮细胞增殖的影响; 3.2通过细胞划痕试验检测CD151基因对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响; 3.3通过Western blot方法检测CD151、Akt、P-Akt、PI3K及β1各蛋白在HUVEC中的表达。 结果:与对照组及GFP组相比CD151组能明显促进细胞的增殖(P0.05),而QRD组则显著抑制细胞的增殖;与对照组及GFP组相比CD151组能明显促进细胞的迁移(P0.05),而QRD组则显著抑制细胞的迁移;CD151组和CD151-AAA194-196突变体组的CD151蛋白表达水平较对照组和GFP组明显增加,而CD151组和CD151-AAA194-196突变体组的CD151蛋白表达水平无明显差异;CD151组β1、PI3K、P-Akt蛋白表达量与对照组、GFP组和QRD组相比明显增加;而对照组、GFP组、CD151组和QRD组的总Akt蛋白表达无明显差异(P0.05)。 结论:转染CD151基因及其突变后都能有效的感染HUVEC并明显促进CD151蛋白表达,但因为QRD组改变了CD151与整合素β1的正常结合,进而改变了整合素与下游蛋白的相互作用,明显降低了其生物学效应。其分子机制为CD151与整合素β1形成复合物促进PIK/AKt信号通路的激活,促进HUVEC的迁移和增殖,促进细胞管状结构的形成,进一步促进血管形成。


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