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肺表面活性物质蛋白B基因多态性与早产儿肺部疾病易感性的关系初探

曾凌空  
【摘要】:目的:了解肺表面活性物质蛋白B(SPB)基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的关系。 方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术及基因测序技术检测2008-2010年91名新生儿呼吸窘迫综合征患儿并与182名同胎龄儿比较,观察两组之间肺表面活性物质蛋白B-18及1580多态性位点基因型和等位基因分布的差异。并比较武汉汉族人与不同种族人之间这两个位点基因分布差异。 结果:①○肺表面活性物质蛋白B-18A/C多态性位点在NRDS组和对照组中AA,AC,CC的基因型频率分别为10.9%,40.6%,48.4%,和6.6%,31.1%,62.1%,两组基因型分布无统计学的差异(χ2=4.98,P0.05),但A等位基因频率在NRDS组高于对照组31.3%vs22.3%, P0.05. ②○肺表面活性物质蛋白B 1580C/T多态性位点在NRDS组和对照组中TT,TC,CC3种基因型频率分别为5.5%,30.8%%,63.7%,和6.6%,45.1%,48.4%,两组基因型分布没有统计学的差异(χ2=5.88, P0.05),但C等位基因频率在NRDS组高于对照组(79.1%vs70.9% P0.05) ③○武汉汉族人与美国人、巴西人、丹麦人比较,肺表面活性物质蛋白B 1580C/T等位基因的分布比例分别为74%VS26%;35%VS65%;41%VS57%;46%VS54%。P均小于0.05,日本人为72%VS28%,与武汉汉族人比较P大于0.05。武汉汉族人与巴西人、美国人、丹麦人比较,肺表面活性物质蛋白B-18A/C等位基因比例为25%VS75%;58%VS42%;57%VS43%;61%VS39%.P均小于0.05。 结论:中国武汉汉族人中肺表面活性物质蛋白B-18A/C及1580C/T基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征的易感性相关。A等位基因和C等位基因分别是这两个位点的易感基因。不同种族间在SPB1580和-18基因多态性分布方面有明显差异。 第二部分肺表面活性物质蛋白B基因多态性与支气管肺发育不良易感性的关系 目的:了解肺表面活性物质蛋白B-18A/C和1580C/T基因多态性与支气管肺发育不良易感性的关系. 方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术及基因测序技术检测2007-2010年57名支气管肺发育不良患儿及117名对照组同胎龄儿童的SPB-18及1580基因多态性,比较两组之间SPB-18及1580基因型和基因分布的差异。 结果:○1 BPD组与对照组中肺表面活性物质蛋白B-18A/C多态性位点AA、AC、CC基因型频率分别为14%、45.6%、40.4%和4.9%、31.1%、64.1%;两组间差异有统计学意义,(P0.05),回归分析显示:A等位基因增加新生儿患BPD的风险为:AC/CC与AA/CC的OR值分别为2.3(95%置信区间为1.2-4.7)和4.7(95%置信区间为1.4-16.2),P值分别0.02和0.01。○2肺表面活性物质蛋白B1580C/T多态性位点TT,CT,TT基因型在对照组和BPD组分布分别为6.8%、45.6%、47.6%和12.3%、40.4%、47.4%,对照组和BPD组间没有统计学差异(χ2=1.50, P0.05)。 结论:中国武汉汉族人中肺表面活性物质蛋白BB-18基因多态性是支气管肺发育不良的危险因素,基因型为AA者是BPD易感人群。肺表面活性物质蛋白B1580 C/T基因多态性与支气管肺发育不良发病没有明显相关性。关键词:肺表面活性物质蛋白基因多态性支气管肺发育不良易感性 第三部分高分辨率熔解曲线分析技术在检测肺表面活性物质蛋白B-18基因多态性中的应用 目的:探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting, HRM)分析技术在检测肺表面活性物质蛋白B (Surfactant Protein B,SPB)-18基因多态性中的应用。方法:利用高分辨率熔解曲线分析技术检测SPB-18基因多态性位点,并以基因测序这一金标准检验其结果的可靠性。 结果:应用高分辨率熔解曲线分析肺表面活性物质蛋白B-18位点基因多态性分型结果显示,80例样品中有3种类型熔解曲线, A型42例,B型33例,C型5例。测序结果显示,SPB-18 A型熔解曲线代表其基因型为CC,B型熔解曲线代表基因型CA,C型熔解曲线代表基因型为AA,高分辨率熔解曲线分析技术分析结果与基因测序结果完全一致。 结论:本研究表明高分辨率熔解曲线分析技术分析技术能准确检测肺表面活性物质蛋白B-18基因多态性,是一种适合大规模筛查SPB-18多态性的方法。 第四部分肺表面活性物质蛋白B-18基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征的关系 目的了解肺表面活性物质蛋白B(SPB)-18基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)易感性的关系及其机制。 方法①应用高分辨率溶解曲线法(High Resolution Melting HRM)和基因测序法检测2009年5月-2010年12月100名新生儿呼吸窘迫综合征患儿及186名同胎龄儿肺表面活性物质蛋白B -18多态性位点基因型和等位基因的差异。○2应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测2009年5月-2010年12月29例基因型为SPB-18CA和32例SPB-18CC的足月新生儿支气管肺泡灌洗液中SPB水平,比较两组之间差异. 结果①肺表面活性物质蛋白B -18A/C多态性位点在NRDS组和对照组中AA,AC,CC的基因型频率分别为11.%,40%,49%,和6.5%,31.7%,61.8%,两组基因型分布无统计学的差异(χ2=4.83,P0.05。);但等位基因A频率在NDRS组和对照组间分别为31%和22.3%,有统计学差异(χ2=5.19,P0.05。)○2基因型为SPB-18CA者比CC者支气管肺泡灌洗液中SPB蛋白水平低。其浓度分别是2824±486ng/ml和5167±927ng/ml,两组间比较P0.05。 结论肺表面活性物质蛋白B-18基因多态性是NRDS的危险因素,A等位基因可能通过影响肺内表面活性物质蛋白B水平,增加NRDS易感性。


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