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SD大鼠背根神经节细胞新取材和培养方法

艾玛;Ammar Ali Ahmed  
【摘要】:【目的】:探讨有效摘取SD大鼠背根神经结(DRG)的方法,为实验取材奠定基础。方法①取材选择为三周SD大鼠,提取DRG神经元。用显微解剖获取足够数量的SD大鼠背根神经结,通过胰蛋白酶+Ⅳ型胶原酶消化②分离:PBS洗涤吸干液体,加入0.2%Ⅳ型胶原酶和0.25%胰蛋白酶放入37℃温箱边消化边用眼科剪剪碎背根神经结重复数次,直到消化液变得粘稠后就可以用滴管吹打,吹打后就可以完全的把背根组织彻底的消化掉,加入含有血清的NBL培养基终止消化,用1000转离心,③原代培养将细胞悬液加入底面铺有L一多聚赖氨酸的培养皿(PP )中,放人37℃、体积分数为0.05的CO_2培养箱中,让其自然贴壁。定期在倒置相差显微镜下观察。 【结果】背根神经结细胞原代贴壁生长较慢,一个月以后才能长满瓶底生长二天后20倍光镜下背根神经结细胞。细胞成簇生长,向四周放射状排列,细胞核圆形透亮,细胞形态多边型,向四周伸出较长的触须,其他类型细胞基本上已经死掉而悬浮在培养基里。


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