胎儿与成人主要器官miRNAs的表达量分析

【摘要】：microRNA(miRNA)是生物体内类长约21-25个核苷酸的非蛋白编码的单链小分子RNA。它以碱基互补配对的方式结合到靶mRNA的3非翻译区(3UTR),通过剪切、降解靶mRNA或是抑制靶mRNA的翻译,在基因转录后水平上微调基因的表达。大量的研究证明,miRNA在细胞的分化、增殖与凋亡,生物体的生长发育,肿瘤的形成以及多种疾病的发生等多种过程中起着极其重要的基因表达调控作用。 研究表明,miRNA的表达具有组织特异性和表达时序性。我们通过检测和分析我们收集到的例成人与例胎儿各七种组织(肝脏组织、肺组织、大肠组织、脾脏组织、肾脏组织、大脑组织、心脏组织)中,miRNA在二者各相应组织中表达含量的异同,来探究其在生物体生长发育过程中的变化趋势并推测相关miRNA的生物学功能。 我们将以上十四个组织分别依次采取:小分子RNA的提取,加多聚A尾,用苯酚-氯仿法抽提多聚A尾的小RNA,逆转录,在特定PCR体系下进行逆转录PCR以及实时荧光定量PCR等实验方法来检测miRNA的表达含量。 经过相关的统计学分析,我们发现胎儿样本各组织中总miRNAs的表达量比相对应的成人样本中总miRNAs的表达量高。与此同时,在胎儿及成人相对应的组织中表达量排名前十的miRNA的种类也不尽相同。而胎儿样本跟成人样本在相同组织中同种miRNA的表达量上也有很大的不同。 通过对miRNAs靶基因的预测分析,我们发现miRNAs的表达是具有协同性的,很多miRNAs通过协同表达,对某种或几种与细胞增殖,组织分化等生长发育相关或关键的基因进行调控。我们推测在胚胎发育时期,miRNA在生长发育过程中所扮演的角色是至关重要的。相较而言,miRNA在正常成人机体中的所发挥的调控作用则并没有胚胎时期那么的显著。