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补肾安胎方及其拆方对超排卵小鼠胚胎着床干预的比较

孟艳岑  
【摘要】:目的: 观察补肾活血方及其补肾、活血组分对控制性超促排卵(Controlled Ovarian Hyperstimulation,COH)小鼠胚泡着床期基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9,基质金属蛋白酶抑制因子-3、转化生长因子-β1及整合素αvβ3的影响,探讨补肾活血方及其拆方对胚胎植入阶段的作用机制,明确拆方两组分间是否存在选择或协同作用;为补肾、活血法治疗不孕症提供现代科学依据。 方法: 将小鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组和活血组。正常组为下午5:00腹腔注射生理盐水0.1ml,48小时后腹腔注射生理盐水0.1ml后按雌雄比例1~2:1当晚合笼,模型组和中药组于下午5:00腹腔注射PMSG 10IU,48小时后腹腔注射HCG 10IU,于注射HCG当晚按雌雄比例1~2:1合笼。次日早晨7:00~8:00检查雌鼠阴道,发现阴栓者计为妊娠第1天(Pd1,pregnant day 1)。正常组和模型组于注射PMSG日起每日上午8时灌服双蒸水0.3ml,中药组灌服相应中药0.3ml。于妊娠第5、6、7天收集小鼠子宫标本。观察小鼠Pd5、Pd6、Pd7着床位点数;采用实时定量RT-PCR方法测定Pd5、Pd6、Pd7子宫内膜MMP-2、MMP-9、TIMP-3、TGF-β1及整合素αvβ3 mRNA的表达,免疫组织化学法测定同时期子宫内膜MMP-2、MMP-9、TIMP-3、TGF-β1及整合素αvβ3蛋白的表达。 结果: 1、各组小鼠着床位点数比较 模型组及各中药治疗组的着床位点数均显著高于正常组。中药治疗组高于模型组,但无统计学差异。中药治疗组中,补肾安胎组高于其余两组,但无统计学差异。 2、实时定量RT-PCR结果比较 在MMP-2 mRNA的表达上,与正常组比较,Pd5、6模型组显著升高(p0.05),但是,Pd7中模型组显著低于正常组(p0.01);与模型组比较,中药治疗组中都不同程度上高于模型组,以活血组更为明显(p0.05)。在MMP-9 mRNA的表达上,从Pd5、6、7正常组逐渐升高,而模型组在Pd5呈现先下降后上升的趋势,与模型组比较,各中药治疗组在Pd7均显著增加(p0.05)。在TIMP-3mRNA的表达上,从Pd5到Pd7逐渐升高,而模型组则未表现出升高的趋势,与正常组比较,模型组在Pd5、6、7均有显著性差别(p0.05);各中药表现出与正常组相同的趋势,但是,在Pd7各中药组显著高于模型组(p0.05)。在TGF-β1mRNA的表达上,在Pd5、6,与正常组比较,模型组显著增加(p0.05),各中药治疗组在Pd5、7接近正常组,其中活血组与正常组的表达趋势完全一致。在整合素αvβ3 mRNA的表达上,在Pd5、6、7表达基本持平,与正常组比较,模型组在Pd5、6显著增高(p0.05),而在Pd7却显著下降(p0.05);与模型组比较,各中药组出现不同的表达趋势。 3、免疫组化结果比较 MMP-2,MMP-9,TIMP-3蛋白表达在着床期间子宫内膜腺上皮和腔上皮细胞中,随着蜕膜化发展,表达于蜕膜化间质细胞中;TGF-β1在Pd5表达在初级蜕膜带,随着蜕膜化发展,在次级蜕膜带及细胞外基质表达,在腔上皮和腺上皮也有弱阳性表达;整合素αvβ3在腔上皮和腺上皮呈阳性表达,蜕膜化间质细胞中呈弱阳性表达。5组小鼠表达空间分布无明显差异。 正常组基质紧密,腺体丰富,模型组基质稀疏,腺体偏少;中药组腺体和间质分布程度介于两者之间。 结论: 补肾安胎方及补肾、活血组分能够改善超促排卵小鼠的着床位点数,并使MMP-2,MMP-9,TIMP-3的mRNA趋于正常,在TGF-β1和整合素αvβ3上,并没有显出明显的差别。补肾、活血组分在改善胚泡着床中具有协同作用,活血中药没有表现出负面的影响。


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