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围着床期小鼠子宫Hoxa11,Meis1,Cdh1和Ctnnb1在不同控制性超排卵方案下的表达及相互关系的初步研究

熊敏  
【摘要】:第一部分控制性超排卵处理的小鼠围着床期子宫内膜Hoxal1, Meisl, Cdnl和Ctnnbl的表达 目的:通过检测控制性超排卵处理小鼠围着床期子宫内膜Hoxal1, Meisl, Cdn1和Ctnnbl的表达,评估各超排卵方案对子宫内膜容受性的影响。 方法:建立模拟人IVF超排卵方案的小鼠模型,分成四组:对照组,GnRH激动剂组,GnRH拮抗剂组和单纯HMG组,剂量按临床给药换算小鼠使用剂量。在HCG日48小时后取子宫,样本分成两份冻存于-80℃,一份预备提取RNA,一份提取蛋白。从mRNA水平和蛋白水平检测Hoxal1, Meisl, Cdnl和Ctnnb1的表达。 结果:Hoxal1, Meis1, Cdhl和Ctnnbl的mRNA和蛋白在控制性超排卵的各组和对照组相比表达都下调。在控制性超排卵的各组中,Hoxal 1和Ctnnb1在GnRH激动剂组中表达最低,Meis1和Cdhl在GnRH激动剂和拮抗剂组中的表达明显低于HMG组,且在GnRH激动剂组和拮抗剂组中没有差异。Hoxal 1和Ctnnb1的表达在各组中的变化,Meisl和Cdh1在各组中的表达呈阳性相关。 结论:控制性超排卵能显著下调Hoxal1, Meisl, Cdh1和Ctnnb1在子宫内膜围着床期的表达。小鼠子宫Cdh1和Ctnnb1的表达有可能与Meisl和Hoxal1的调节相关。 目的:为了研究Hoxal1和Ctnnb1, Meisl和Cdhl之间是否存在相互调节关系,构建荧光表达载体pEGFP-Hoxal 1和pDsRed-Meisl。 方法:采用DNA重组技术,将目的基因Hoxal1, Meisl克隆至含有报告基因EGFP和DsRed的pEGFP-N1和pDsRed-N1真核表达中,构建的真核表达载体pEGFP-Hoxal1和pDsRed-Meisl经PCR,双酶切及基因测序鉴定;转染至CHO细胞,荧光显微镜下观察重组质粒的表达,提取细胞蛋白western blot检测蛋白表达。 结果:pEGFP-Hoxal1和pDsRed-Meisl重组质粒构建成功。构建的真核表达载体pEGFP-Hoxal1和pDsRed-Meisl能在CHO细胞中有效表达。 结论:构建的pEGFP-Hoxal1和pDsRed-Meisl重组质粒能有效表达Hoxal1-EGFP和Meisl-DsRed融合蛋白。 第三部分子宫内转染pEGFP-Hoxall及pDsRed-Meisl分别使Ctnnbl和Cdhl的表达明显增加 目的:研究Hoxal1, Meis1与Cdh1和Ctnnb1在子宫内膜中的相互关系,为探讨其功能奠定基础。 方法:将未处理的成熟雌性小鼠和雄性小鼠同笼,发现阴道栓后30-60小时,两侧子宫角注射pEGFP-Hoxal 1和pDsRed-Meis1重组质粒及其空白质粒,每组5只。妊娠第5天取小鼠子宫,样本分成三份,一份固定于福尔马林固定剂,备做免疫组化;一份保存于-80℃,备提取蛋白做Western-blot;一份立即做冰冻切片,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。 结果:1 Hoxall-EGFP和Meis1-DsRed融合蛋白在子宫内膜腔上皮细胞,腺细胞和基质细胞有效表达。 2 Western-blot鉴定Hoxal1和Meisl的表达,Meisl过表达的子宫内膜Cdhl表达增加,Hoxal 1过表达的子宫内膜Ctnnb1表达增加。 3免疫组化切片中Meisl过表达的子宫内膜腔上皮细胞和腺细胞膜表面Cdh1表达明显增强。Hoxal 1过表达的子宫内膜基质细胞中Ctnnb1的表达明显增强。 结论:Hoxal 1和Meisl可能与在子宫内膜中Ctnnb1和Cdh1表达的调节有关。


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