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ATDC在大肠癌中的表达及其临床意义和对肿瘤细胞生物学行为的影响

邓军  
【摘要】:第一部分ATDC蛋白在大肠癌中的表达及临床意义 目的通过对大肠癌临床标本中ATDC蛋白表达水平进行检测,探讨ATDC表达在大肠癌的发生发展中的作用,以及它和大肠癌临床病理特征之间的关系。 方法使用免疫组织化学方法检测大肠癌病人癌组织和正常切缘组织中的ATDC蛋白表达和定位,Westemblot和RT-PCR定量ATDC蛋白的表达水平,分析ATDC蛋白和临床病理参数之间的关系。 结果ATDC蛋白在切缘正常组织和癌组织表达差异有统计学意义(P0.05),癌组织中ATDC表达在性别、年龄、Dukes分期因素之间差异无统计学意义,在淋巴结转移及分化程度因素间差异有统计学意义。 结论ATDC在大肠癌组织中高水平表达,提示此基因与肿瘤的发生发展过程有关。因此为了更好的诊断和治疗大肠癌有必要检测和抑制ATDC表达。大肠癌临床病参数和ATDC表达情况相关,表明检测ATDC表达水平对于评估近期治疗效果和远期预后有一定的临床价值。 第二部分RNA干扰沉默ATDC表达对大肠癌细胞生物学特性的影响 目的应用针对人ATDC的特异性RNA干扰(RNAi)的方法,沉默大肠癌ATDC基因表达,观察其对人大肠癌细胞株生长的抑制作用。 方法设计合成针对ATDC的siRNA,利用Lipofactamine 2000试剂转染到人大肠癌细胞株sw620。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测SW620细胞ATDC mRNA表达量和Western bolt检测ATDC蛋白表达水平评估ATDC基因沉默效果,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell侵袭实验分析大肠癌细胞体外侵袭能力。 结果转染siRNA组细胞较未转染组比较,RNAi使得:mRNA的表达下降40%同时使得ATDC蛋白在转染组较非转染组明显下降。转染后细胞主要停留在Go/G1期,S期和S2/M期细胞数量减少。Transwell侵袭实验显示转染后细胞的转移侵袭能力下降。 结论siRNA能抑制sw-620细胞中ATDC基因的表达,降低癌细胞的增殖侵袭能力。


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