收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制研究

尹德龙  
【摘要】:第一部分 表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定 目的体外分离培养表皮干细胞,并对所取表皮干细胞进行形态学,特异标志物进行检测,以确保所取细胞为表皮干细胞。 方法根据之前研究者的体外培养的表皮干细胞方法进行综合,并成功提取出表皮干细胞,进行体外培养,选取表皮干细胞特定的表面标记物CK19,整合素β1运用免疫荧光染色鉴定,并对细胞进行整合素a6和CD71双染色通过流式细胞仪检测,鉴定所取的细胞为表皮干细胞。 结果根据倒置相差显微镜所得细胞形态,免疫荧光检测结果显示所取细胞CK19及整合素p1阳性,及流式细胞仪检测指标结果所取细胞整合素a6阳性,CD71阴性。 结论体外成功分离培养出表皮干细胞。 第二部分 不同频率低强度电磁场对表皮干细胞beta-catenin, Myc基因的影响 目的观察表皮干细胞的增殖、分化相关基因myc, beta-catenin在低频电磁场中的变化。 方法从大鼠背部皮肤处分离的第2代表皮干细胞(EpiSC)分为实验组和对照组,实验组又根据低强度磁场频率不同分为15,50,75Hz组。将各组细胞进行形态学观察,免疫荧光染色检测,RT-PCR检测相关基因的表达变化,免疫组化鉴定细胞的相关蛋白表达情况。 结果表皮干细胞在受到低强度磁场刺激后myc,β-catenin与对照组比有显著差异(P0.01),且不同频率下存在差异,50Hz75Hz15Hz(P0.05)。 结论低强度脉冲电磁场能促进表皮干细胞分化,不同频率刺激效果不同。 第三部分 Nanog和β-catenin对表皮干细胞增殖、分化中新的调控点 目的明确在表皮干细胞的增殖和分化的过程中Nanog通路和wnt/β-catenin通路是否存在内在联系。 方法本实验从大鼠背部皮肤处分离的第2代表皮干细胞(EpiSC)分为实验组和对照组,将各组细胞进行形态学观察,免疫荧光染色检测,用MTT法测定表皮干细胞的增殖,免疫组化鉴定细胞的相关蛋白整合素β-1及CK15表达情况。Western Blotting、PCR测定β-catenin和Nanog含量水平的变化。 结果MTT法检测到10-7M SP显著促进EpSCs的增殖,且EpSCs仍保持其干细胞性。Western Blotting检测到β-catenin和Nanog蛋白在最初24小时少量表达, Nanog蛋白水平在24h后显著表达并持续72h,72h后明显下降。而β-catenin蛋白水平在整个过程中持续升高。PCR检测到Nanog mRNA在整个过程中表达降低,β-catenin mRNA和Myc mRNA在整个增殖过程中持续高表达。 结论实验表明10-7M神经肽SP物质可有效的刺激表皮干细胞的增殖,表明Nanog通路和wnt/β-catenin通路的可能存在联系。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 付小兵;李建福;盛志勇;;表皮干细胞:实现创面由解剖修复到功能修复飞跃的新策略[J];感染.炎症.修复;2002年04期
2 牛云飞,路卫,夏照帆;表皮干细胞的分离及鉴定[J];第二军医大学学报;2004年08期
3 黄晖,赖西南,王正国,王丽丽,陈志雄;感觉神经肽P物质在表皮干细胞分化中作用的实验研究[J];中华烧伤杂志;2004年05期
4 牛云飞,路卫,夏照帆,张步涛,韦多,田建广,程大胜;表皮干细胞在人体不同部位皮肤的分布差异[J];第二军医大学学报;2004年09期
5 陈东来,庞晓纲;表皮干细胞的生物学特性与临床应用研究进展[J];中国美容医学;2005年05期
6 刘虎仙;贾赤宇;付小兵;谢晓繁;;表皮干细胞来源、分布及其在创面愈合中的作用[J];中华创伤杂志;2006年03期
7 王小兵;王晓健;张宝林;;创伤愈合中bFGF bFGF受体的研究进展及其对表皮干细胞的影响[J];山西医药杂志;2007年07期
8 程大胜 ,夏照帆,唐洪泰,田建广,王皓;一种表皮干细胞检测方法的建立[J];解放军医学杂志;2003年06期
9 李建福,付小兵,盛志勇,孙同柱;创面愈合过程中创缘表皮干细胞的再分布[J];中华医学杂志;2003年03期
10 田田;李英春;;胚胎干细胞源性表皮干细胞的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2008年04期
11 耿松梅;表皮干细胞研究新进展[J];中国皮肤性病学杂志;2002年03期
12 董蕊,金岩,刘源,赵宇,王容;表皮干细胞在成人及胎儿不同部位皮肤中的比较研究[J];第四军医大学学报;2003年18期
13 林京玉,丁日高,应翔宇;表皮干细胞增殖与分化的分子调控研究进展[J];军事医学科学院院刊;2003年04期
14 伍津津,吴先林;表皮干细胞的定向分化:隆突激活假说的新认识[J];中国临床康复;2003年04期
15 谢举临,利天增,祁少海,卞徽宁,成建定,徐盈斌,梁慧珍;烫伤大鼠不同深度创面组织中表皮干细胞分布的初步研究[J];中华烧伤杂志;2003年06期
16 罗鸿;陶泽璋;;鼓膜表皮干细胞的研究及应用前景[J];听力学及言语疾病杂志;2006年02期
17 李富;付小兵;刘文忠;;人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展[J];感染.炎症.修复;2008年04期
18 黄晖;赖西南;王正国;王丽丽;谢江;詹钢;;毛囊不同发育阶段表皮干细胞NK-1受体表达特征的实验研究[J];感染.炎症.修复;2003年01期
19 洪清琦;杨斌;;表皮干细胞的定位、标记物及其分离培养的研究进展[J];广东医学;2006年01期
20 谢举临,利天增;组织工程皮肤的种子细胞——表皮干细胞的生物学行为研究进展[J];国外医学.生物医学工程分册;2001年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王冰梅;葛香连;林程琳;宋颖楠;张彦定;;诱导人表皮干细胞向成釉质细胞分化[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
2 李孝建;沈雁;张志;曾耀英;李延仓;杨小红;;鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
3 朱飞滨;刘德伍;张红艳;彭燕;钟清玲;李勇铁;;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
4 白晓智;张战凤;赵周婷;蔡维霞;石继红;汤朝武;朱雄翔;胡大海;;热损伤后表皮细胞培养上清诱导脂肪干细胞向表皮干细胞表型转分化的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
5 陶克;陈璧;丁国斌;谢松涛;王洪涛;胡大海;;联合应用3-甲基-1-异丁基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松对人胎儿表皮干细胞的诱导分化作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
6 钟清玲;刘繁荣;刘德伍;;表皮干细胞向皮肤附件诱导分化研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 张杨;李秀兰;华云旗;;表皮干细胞与毛囊干细胞生物学特性比较[A];第十五次全国中西医结合疡科学术交流会论文汇编[C];2011年
8 谢晓繁;刘虎仙;付小兵;贾赤宇;;表皮干细胞分离和鉴定的研究进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 彭燕;彭青;蔡爱英;刘德伍;钟清玲;蓝蔚;;表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
10 廖立新;陈刚泉;李国辉;李剑;;以表皮干细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 尹德龙;表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制研究[D];华中科技大学;2012年
2 王联群;hTERT基因在人表皮干细胞中的表达与调控研究[D];南昌大学;2010年
3 李孝建;鼠表皮干细胞培养体系及构建组织工程皮肤的研究[D];暨南大学;2009年
4 钟清玲;糖尿病大鼠表皮干细胞β-catenin和cyclinD1的表达及其在创面修复中的作用研究[D];南昌大学;2011年
5 李美蓉;表皮干细胞多向分化潜能特征的发现及其相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 纪世召;模拟干细胞Niche同步实现表皮干细胞扩增与皮肤替代物构建的实验研究[D];第二军医大学;2012年
7 韩军涛;胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及其在表皮和毛囊再生中的作用[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 李娟;Kruppel样因子4(KLF4)在小鼠表皮干细胞中的表达和功能研究[D];华中科技大学;2011年
9 李力;生物电场促进皮肤创面修复的细胞机制[D];第三军医大学;2012年
10 赵志力;去分化表皮细胞重获再生表皮能力的研究[D];第三军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨青;毛囊干细胞和表皮干细胞生物学特性的比较研究[D];天津医科大学;2012年
2 陈萌;免疫荧光双标法应用于小鼠表皮干细胞分子标记的筛选[D];山东大学;2011年
3 詹日兴;一氧化氮在烧伤后表皮干细胞离巢迁移中作用的实验研究[D];第三军医大学;2012年
4 李云剑;培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响[D];南京医科大学;2010年
5 陈兰;龟板有效成分对胎鼠表皮干细胞凋亡的影响[D];广州中医药大学;2011年
6 朱飞滨;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生的实验研究[D];南昌大学;2011年
7 方碧清;碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究[D];福建医科大学;2011年
8 陈季玲;急性β射线皮肤损伤创面及其表皮干细胞变化的实验研究[D];南华大学;2012年
9 孙薇;P311促进烧伤创面表皮干细胞迁移的实验研究[D];第三军医大学;2012年
10 李欣;不同条件下银屑病患者表皮干细胞分离、培养、鉴定及生物学特性的初步研究[D];山西医科大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张献怀;我国创伤修复研究取得新进展[N];中国医药报;2009年
2 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗获新进展[N];大众科技报;2009年
3 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗取得新进展[N];科技日报;2009年
4 记者 涂端玉 通讯员 陈景荣 钟志勇;巨型老鼠体内注有马骝基因[N];广州日报;2007年
5 张献怀;创伤修复研究发现三种生物学现象[N];健康报;2009年
6 壮锦;人工培育器官:中国科学家打下坚实基础[N];新华每日电讯;2007年
7 本报通讯员 张献怀 本报记者 仇方迎;“返老还童”有望梦想成真[N];科技日报;2001年
8 支勇平 记者 张哲浩;我首次建成人类胎儿胰腺干细胞系[N];科技日报;2004年
9 张献怀;解放军总医院一附院 科研创新硕果满枝[N];科技日报;2009年
10 刘霞;科学家在毛囊中发现“皮肤干细胞之母”[N];科技日报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978