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多发性骨髓瘤微泡抑制MSCs成骨分化及机制研究

张利铭  
【摘要】:目的:观察MM—MV形态、免疫表型;探讨分离MSCs方法;证实MV与MSCs相互作用。 方法:应用透射电镜观察MV大小、形态:流式细胞仪检测MV免疫表型特征。采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型。激光共聚焦显微镜及流式细胞仪证实MM-MV与MSC作用。 结果:MV表达母体细胞表面标志CD138,电镜下见大小不一,0.3~1gm之间的囊泡结构。传代后的MSCs形态均一,呈成纤维细胞样;第三代MSCs CD90、CDl3、CDl05、 CD44阳性,CD34. CD45、 CDl4阴性;96.47%细胞处于G0/G1期。MSCs在2h内即摄取、内化MM-Mv;MV传递CDl38,MSCs表型部分转化。 结论:MM细胞释放CD138阳性MV;全骨髓贴壁法体外分离培养MSCs简便、经济、高效;MV为MM细胞与MSCs新作用途径。 目的:探讨MM-MV对MSCs成骨分化作用。 方法:ALP、茜素红染色观察CFU-Fs、 CFU-OB; MTT法检测MV与MSCs共培养24-72h对MSCs增殖影响;FCM检测MV与MSCs共培养两周对细胞凋亡影响;Quantitative real time RT-PCR检测共培养d3、 d6RUNX2及骨标志基因AL、 osteocalcin、 collagen ⅠmRNA表达;Elisa法检测培养上清中骨钙蛋白水平;ALP活性试剂盒检测培养上清中ALP活性。 结果:①8226、U266上清、条件上清抑制CFU-F形成,但条件上清的抑制作用弱于上清(P0.05);KM3上清抑制CFU-F形成,而KM3条件上清无抑制作用(P0.05、P0.05);KM3上清抑制CFU-OB形成,条件上清对CFU-OB无抑制作用(P0.01、P0.05)。②50-100ng/ml MM-MV对MSCs无增殖、凋亡作用。③8226、U266、KM3MV抑制CFU-F形成(P0.01、 P0.05、 P0.05), K562MV无抑制作用(P0.05);8226、 U266、 KM3MV显著抑制CFU-OB形成(P0.01),8226MV作用强于U266MV (P0.05);而K562MV无作用。④诱导d3,d6MV下调osteocalcin mRNA表达(P0.01);诱导d6, MM-MV下调RUNX2mRNA表达,K562MV无作用;U266、KM3MV抑制ALP mRNA表达;U266MV抑制Collagen Ⅰ mRNA表达。⑤诱导d6, U266MV抑制骨钙蛋白分泌(P0.05);d9,d12骨钙蛋白分泌显著受抑(P0.01)。⑥诱导d6,8226、 KM3MV抑制ALP活性(P0.01、P0.05);诱导d12,MV组ALP活性均减低,以8226MV作用最为显著(P0.01)。 结论:MM-MV抑制MSCs成骨分化 目的:MM-MV抑制MSCs成骨分化机制研究 方法:Western blot法检测MM细胞、MM-MV内DKK-1、 sFRP2、 IL-7的表达。ALP染色法观察IL-7中和抗体对U266、 KM3MV成骨抑制的阻断效应。Western blot法检测RUNX2蛋白、β-catenin、磷酸化及去磷酸化水平。ELISA法检测RUNX2活性。 结果:①MM-MV选择性包装成骨抑制因子sFRP2、 IL-7。8226、 KM3细胞表达DKKl而其MV不表达;8226、 U266、 KM3细胞不表达sFRP2,而8226MV、 KM3MV表达;8226、U266、KM3细胞均表达IL-7,表达强弱顺序依次为KM3、8226、U266,而MV内IL-7表达却相反,U266MV浓缩表达IL-7,高于其母体细胞,而8226MV内IL-7表达低于细胞,KM3MV表达量极低。②IL-7中和抗体阻断U266MV成骨抑制效应(P0.05),对KM3MV无阻断作用(P0.05)。③8226、U266MV抑制RUNX2蛋白表达及活性。④MM-MV作用一周后,MSCs胞浆内磷酸化β-catenin蛋白水平明显升高;8226、KM3MV导致胞浆β-catenin磷酸化强于U266MV,与MV内sFRP2表达水平基本一致。 结论:MV成骨抑制作用取决于其包装的分子内容物。8226MV表达IL-7、 sFRP2,通过Wnt/β-catenin及RUNX2双通路作用MSCs,成骨抑制最强;U266MV主要经IL-7抑制RUNX2活性,KM3MV经sFRP2作用Wnt通路,成骨抑制弱于8226MV。


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9 河南省肿瘤研究所 程心超;识别多发性骨髓瘤[N];健康报;2010年
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