收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

丙酮酸钠在缺氧缺血脑损伤中的神经保护作用

潘睿  
【摘要】:第一部分丙酮酸钠对缺氧缺血脑损伤的保护作用 目的运用新生大鼠建立体外缺糖缺氧细胞和体内缺氧缺血脑损伤动物模型,观察丙酮酸钠(Sodium Pyruvate, SP)对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用。方法模拟缺氧缺血建立细胞模型(oxygen and glucose deprivation, OGD)和动物模型(Hypoxia ischemia, HI)。结扎生后7天新生大鼠左侧颈总动脉,暴露于8%氧气2.5个小时,构建良好稳定的HI动物模型。提取新生大鼠大脑皮质原代神经元,体外培养7天,给与缺氧缺糖2.5个小时,构建OGD细胞模型。分别在不同时间点给予不同浓度的SP治疗。细胞试验分为对照组、OGD组和不同浓度SP治疗组,而动物模型分为假手术组、模型组和不同浓度、给药时间SP治疗组。LDH和MTT用于检测细胞死亡和生存状态。TTC染色、FJB染色、Cresyl Violet染色检测缺氧缺血脑组织损伤后不同时间点神经元的凋亡和脑损伤程度。 结果体外实验显示,OGD后24小时SP可以逆转大脑皮层原代神经元LDH释放的增加和MTT水平的下降,且表现为剂量-依从性。2mM和4mM浓度效果最佳。HI后48小时脑组织TTC染色,SP在浓度125-1000 mg/kg之间可以显著降低HI对未成熟脑组织的损伤,如果在HI损伤后5分钟腹腔注射给与SP500 mg/kg可以获得最大疗效。和模型组相比,SP在HI损伤后24小时显著降低左侧(损伤侧)大脑皮层FJ-B染色阳性神经元。Cresyl Violet染色显示HI后第7天大脑冠状位形态发现丙酮酸钠可以使HI损伤后左侧存活/右侧存活的大脑皮层组织和海马组织比例分别从45.3士11.9%、39.2±8.7%升高到80士5.5%、67.3±9%。 结论体外体内实验都显示丙酮酸钠对缺氧缺血脑损伤有神经保护作用 第二部分丙酮酸钠对缺氧缺血脑损伤远期行为学的影响 目的明确丙酮酸钠(Sodium Pyruvate, SP)能否促进新生大鼠缺氧缺血脑损伤后远期功能恢复。 方法构建缺氧缺血(Hypoxic-ischemic, HI)动物模型,给予SP治疗。实验分为三组,假手术组、模型组和SP治疗组。HI损伤后3周进行足失误试验(Foot Fault Test, FFT),记录大鼠在5分钟内50步中右侧前肢及后肢失足次数,评价大鼠感觉运动功能。在HI造模后8周进行Morris水迷宫(Morris Water Maze, MWM)试验检测SP对大鼠空间学习记忆能力的影响。MWM试验包括隐蔽平台试验(Learning Trial) 4天和第5天的空间探索试验(Probe Trial)及可视平台试验(Cued Trial),记录大鼠的逃避潜伏期(Latency)、原平台象限停留时间(The Time Spent in the Platform Quadrant)及游泳速度(Velocity)。行为学试验后取大脑行Cresyl Violet染色观察大脑皮层(感觉运动功能)和海马(空间学习记忆能力)损伤情况。 结果在FFT中,模型组(The Vehicle-treated Group)中大鼠右侧前、后肢失足次数明显高于假手术组(Sham Group),但SP组中失足次数明显下降,说明SP可促进脑损伤后大鼠感觉运动功能恢复。MWM隐蔽平台试验中,模型组大鼠逃避潜伏期明显高于假手术组,而SP治疗后大鼠逃避潜伏期明显被改善。空间探索试验中,模型组大鼠在原平台象限停留时间只有假手术组的一半,而SP治疗后大鼠停留时间明显升高,且三组大鼠游泳速度无明显差异,说明SP可改善脑损伤后大鼠空间学习记忆功能。可视平台试验结果三组之间无差异排除了视觉障碍对空间学习记忆影响。大鼠HI损伤后左侧存活/右侧存活的大脑皮层和海马组织分别为51%士9.9%和28.7%±7.4%,SP治疗后分别为87.2%±3.9%和77.9%士3.6%,两者相比有显著差异。 结论SP可促进HI损伤后大鼠感觉运动功能和空间记忆功能的恢复 第三部分丙酮酸钠在缺氧缺血脑损伤中神经保护机制的研究 目的运用OGD细胞模型和HI动物模型,研究丙酮酸钠对缺氧缺血脑损伤神经保护作用的相关机制。 方法分别与OGD和HI后不同时间点检测三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate, ATP)、活性氧自由基(Reactive Oxygen Species, ROS)、Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax、凋亡信号通路蛋白Cleaved Caspase-3和Caspase-3、存活信号通路蛋白P-Akt和Akt表达水平的变化,并选取OGD和HI后以上各指标有统计学差异的时间点给予SP治疗。细胞模型分为对照组、OGD组和SP治疗组,动物模型分为假手术组、模型组和SP治疗组。 结果1.与对照组对比,OGD后ROS水平逐渐升高,呈时间依赖型,于4h开始升高有显著差异(p0.05),24h升至最高(OGD/Ctrl=1.5±0.03, p0.05)。SP将OGD后24h升高的ROS降低到了接近正常的水平(p0.05)。2.和假手术组对比,HI后ROS水平于3h升至最高(p0.05),后逐渐下降。SP将模型组HI后3h升高的ROS水平降低到了接近正常的水平(p0.05)。3.与对照组对比,OGD后ATP水平于4h降至最低(OGD/Ctrl=0.49±0.07, p0.05), SP将OGD后降低的ATP水平升高了约50%(p0.05)。4.分别于HI后3h、16h给予SP治疗,SP分别将不同时间点模型组中降低的ATP水平升高约50%以上(p0.05)。5.相比于对照组,OGD后0.5h, Bax表达水平达到最高(p0.05),24h回到基础水平。SP将OGD后0.5h升高的Bax表达基本降到了对照组水平(p0.05)。6.H1后3h,相比于假手术组,模型组中Bax显著升高(p0.05),而SP治疗降低了HI后升高的Bax水平(p0.05)。7.相比于对照组,OGD后Cleaved Caspase-3表达水平于4h逐渐升高(p0.05),24h表达水平达到最高(p0.05)。SP将OGD后24h升高的Bax表达水平降低约50%(p0.05)。8.HI后24h,模型组中Cleaved Caspase-3显著升高(p0.01),而SP治疗组中Cleaved Caspase-3水平与模型组相比降低了约50%(p0.05)。9.相比于对照组,OGD后P-Akt表达水平先升高,于1h表达水平达到最高(p0.01),后逐渐下降。OGD后1h,与OGD组对比,SP进一步升高了P-Akt表达水平(p0.05)。10.HI后, P-Akt表达先升高后下降,于16小时降至假手术组的一半(p0.05)。HI后16h,与模型组对比,SP治疗显著升高P-Akt的表达水平(p0.05)。 结论体内HI、体外OGD试验均显示,SP可能通过改善大脑能量代谢(ATP)、降低氧化应激水平(ROS)和阻止神经细胞死亡程序启动途径发挥缺氧缺血脑损伤的神经保护作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王簃兰;芳香族烃类经皮肤的渗透量[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
2 张寅恭;新杀虫剂Пиримор的卫生毒理学[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
3 蔡海英,张金生,崔小邢,郑国墚,黄孔威;国产维甲酸衍生物对大鼠食管上皮癌变的抑制作用[J];癌症;1983年04期
4 高强;大鼠直肠给心得安以避免首过消除效应[J];国外医学.药学分册;1983年01期
5 Seigo SHUMIYA;Sumi NAGASE;蔡华琬;;大鼠(Rattus Norvegicus)无白蛋白基因(Aualbumia)和盖帽基因(Hooded)的连锁[J];实验动物与比较医学;1983年01期
6 陈国志,黄淑英,王广义,刘志红;豚鼠和大鼠小肠移行性肌电复合波(MMC)的观察[J];基础医学与临床;1984年03期
7 横路谦次郎;不同类型辐射照射复合催乳素诱发大鼠乳腺肿瘤的效果[J];辐射防护;1984年03期
8 温志永;;幼鼠夜间PR 峰的出现对孕酮的依赖作用[J];国外医学.妇产科学分册;1989年05期
9 赵学增;郑富稳;夏烨;;普萘洛尔对雌性大鼠生殖机能的影响[J];河北医科大学学报;1989年03期
10 郑培敏;熊克仁;江家元;;大鼠斜角带核水平支的传入和传出联系——WGA—HRP和HRP法研究[J];皖南医学院学报;1989年04期
11 韦志康,王玉民,伦明跃,徐琳,李云华,邓志诚,吴浩阳;~(241-)镅和~(238-)钚诱发的大鼠骨肉瘤瘤细胞系生物学特性的比较[J];癌变.畸变.突变;1990年01期
12 张玉林,程鸿,秦震;大鼠大脑中动脉阻断导致局灶脑梗塞[J];复旦学报(医学版);1990年03期
13 邹爱平;654-2和多巴胺对大鼠肾脏微循环作用的比较[J];中国病理生理杂志;1991年06期
14 陈启盛,戴义隆,沈上,田苏平;迷走神经与应激性胃粘膜损害的关系[J];南京医科大学学报(自然科学版);1991年02期
15 迟焕方,王守彪,李相民,李良;大鼠中缝核及其邻近网状结构5-羟色胺能神经元的细胞构筑[J];青岛大学医学院学报;1991年04期
16 朱望,周明非,孙向伟,李静,韩洁,王彦;雄激素对大鼠骨骼肌纤维运动终板超微结构的影响[J];神经解剖学杂志;1991年02期
17 王景梓;周序斌;张黎华;吴葆杰;;二十二碳六烯酸抗心血管病作用的研究——Ⅱ.精制鱼油对大鼠血小板聚集功能的影响[J];山东大学学报(医学版);1991年01期
18 张苏;黄威权;王祖禄;蔡晚霞;苏慧慈;;失血性休克对大鼠胰岛生长抑素免疫反应阳性细胞的影响[J];解剖学报;1991年S1期
19 段重高,王莉,李宏伟,成桂仁;三七皂甙对大鼠脑微循环的影响[J];中国病理生理杂志;1992年05期
20 肖殿模,魏晓芳,郑超强,王小鲁,张俊宝,陈华粹,许彩民,潘华珍;为毒素休克大鼠红细胞蛋白激酶C活性的变化[J];中国病理生理杂志;1992年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程井军;吴其恺;彭锐;孙国杰;;电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织氧化及抗氧化状态的影响[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年
2 杨珺超;宋康;鲁建锋;陈君峰;夏永良;;补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1作用的实验研究[A];2009年中华中医药学会内科分会全国中医内科临床科学研究专题研讨会论文汇编[C];2009年
3 廖慧慧;李芳;何燕萍;;罗氏内异方对子宫内膜异位症模型大鼠内膜整合素a vβ 3表达的影响[A];第九次全国中医妇科学术大会论文集[C];2009年
4 王进荣;王平;孟宪丽;杨永茂;张艳;;单向肠灌流法研究芦荟大黄素的大鼠在体肠吸收[A];第十一届全国中药药理学术大会论文摘要[C];2010年
5 史大卓;;接种Walker256肉瘤对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的影响[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
6 方杰;胡昔权;郑海清;潘三强;李莉莉;;运动训练对脑梗死大鼠室管膜下区神经新生的影响[A];中国康复医学会第十三届全国脑血管病康复学术会议会议指南[C];2010年
7 孙琳;郭春妮;赵永波;;BM6在Aβ致大鼠海马神经元损害中保护作用的研究[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
8 徐存拴;李三强;周爽;;麻醉对大鼠应激反应的影响[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
9 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
10 舒清明;张永亮;李灵芝;何冰;李志强;;蛋白质芯片技术检测脑损伤大鼠血清差异蛋白[A];中国生理学会应用生理学专业委员会暨《中国应用生理学杂志》二十周年纪念大会和学术讨论会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 潘睿;丙酮酸钠在缺氧缺血脑损伤中的神经保护作用[D];华中科技大学;2012年
2 江伟;VitA在缺氧缺血脑损伤中的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2011年
3 杨建新;腹部术后疲劳综合征模型及抗术后疲劳方作用的研究[D];湖北中医学院;2004年
4 杨丹榕;大鼠IgEFcCH2-3受体阻断与IgEFcCH2-3-FasL诱导肥大细胞凋亡的研究[D];第二军医大学;2004年
5 李玉茹;神经营养素及其受体在老年性大鼠耳蜗及下丘中表达规律的研究[D];吉林大学;2005年
6 陈党红;舒筋颗粒对卒中后肌张力增高的影响及可能作用机制探讨[D];广州中医药大学;2005年
7 卢奕;人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究[D];苏州大学;2005年
8 潘静薇;NOGO-B在动脉粥样硬化病变中差异表达的研究[D];第二军医大学;2006年
9 王连友;大鼠液压冲击颅脑损伤模型的立体定向控制研究[D];天津医科大学;2006年
10 陈来照;神经肽Y及其受体在垂体腺瘤中的表达及意义[D];天津医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
2 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
3 杨科峰;基于BCI的大鼠运动行为控制的研究[D];郑州大学;2011年
4 钟丽敏;中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究[D];苏州大学;2011年
5 彭晶;乳化异氟醚对成年大鼠学习记忆功能的影响[D];遵义医学院;2011年
6 刘金凤;螺虫乙酯对大鼠的生理影响及其体内分布检测方法的建立[D];东北农业大学;2011年
7 杜力;桂枝附子去桂加白术汤治疗大鼠弗氏完全佐剂关节炎作用机制的研究[D];辽宁中医药大学;2011年
8 高传长;丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶-1表达的影响[D];南昌大学;2011年
9 罗雯;COX-2shRNA对实验性大鼠肝纤维化的影响[D];南华大学;2012年
10 张雄军;麻醉与手术对大鼠认知功能损害和MMP-9表达改变的研究[D];南华大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;关木通对大鼠致癌性的实验研究[N];中国医药报;2003年
2 刘霞;诱导多功能干细胞让小鼠长出大鼠胰腺[N];科技日报;2011年
3 ;丹参能加快放创复合伤大鼠创面愈合[N];中国中医药报;2005年
4 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
5 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠体内药代动力学和组织分布研究[N];中国医药报;2003年
6 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
7 ;中药复方能逆转腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大[N];中国中医药报;2005年
8 孙忻;人类首次获得克隆大鼠[N];科技日报;2003年
9 阿胜;死亡阴影下孕育生机无限[N];医药经济报;2002年
10 程源;父母吸烟会导致婴儿厌食[N];大众卫生报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978