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IL-33/ST2L通路参与Con A所致小鼠肝损伤的作用及其机制

陈杰  
【摘要】:目的检测Con A所致小鼠急性肝损伤中IL-33表达的改变,通过阻断IL-33观察对动物模型的保护作用,并探讨该效应的细胞和分子机制,为临床治疗急性肝损伤提供实验依据。方法1.尾静脉注射Con A诱导小鼠急性肝损伤,给药后不同时间点实时定量PCR(real time PCR)检测小鼠肝脏IL-33表达水平。在IL-33表达变化最明显的时间点,进一步借助免疫组化验证实验结果。2.外源性给予小鼠IL-33或抗IL-33抗体预处理,检测血清ALT、AST水平及肝脏细胞坏死、凋亡程度,观测对Con A所致急性肝损伤的影响。给予致死剂量ConA,观测抗IL-33抗体对小鼠的保护作用。3.流式细胞术(FCM)检测抗IL-33抗体预处理和对照组小鼠肝脏浸润淋巴细胞(T细胞、NKT细胞、NK细胞)活化程度;FCM和ELISA检测小鼠肝脏淋巴细胞所分泌炎性细胞因子(IL-4、IL-17、IFN-γ、TNF-α等)水平,探讨IL-33参与ConA所致肝损伤的机制。4.用IFN-γ基因敲除小鼠及清除NKT细胞的小鼠,给予IL-33或抗IL-33抗体预处理,检测给予Con A后血清ALT、AST水平,HE染色分析肝脏受损程度,观察IFN-γ和NKT细胞参与Con A所致肝损伤的作用。结果1.IL-33参与小鼠Con A所致肝损伤Con A所致小鼠急性肝损伤模型中,注射Con A 12h后小鼠肝脏内IL-33mRNA水平明显升高;肝脏免疫组化检测发现,IL-33表达明显增加;联合给予Con A和IL-33后12 h,血清ALT和AST水平明显上升,肝细胞坏死增加。2.外源性给予抗IL-33抗体可减轻Con A所致小鼠肝损伤用抗IL-33阻断抗体预处理,然后复制Con A所致肝损伤模型,12h后小鼠血清AST、ALT水平明显降低;肝脏坏死区域明显缩小;TUNEL染色提示肝脏凋亡显著减轻。此外,用抗IL-33阻断抗体预处理,然后给予致死剂量Con A,小鼠死亡率明显降低。3.抗IL-33抗体可抑制Con A所致肝损伤小鼠T细胞、NKT细胞活化及IFN-γ分泌FCM检测发现,抗IL-33抗体预处理的Con A肝损伤小鼠与抗体同型对照组(IgG)相比,肝脏浸润NKT细胞活化程度明显下降,T细胞活化也有所降低,NK细胞活化无明显改变。抗IL-33抗体预处理的肝损伤小鼠,其肝脏浸润淋巴细胞IFN-γ分泌水平明显降低,其他细胞因子(如IL-4、IL-17等)无明显变化。ELISA检测发现,抗IL-33抗体处理组血清IFN-γ水平明显降低,而IL-4、IL-17、TNF-α水平无显著改变。4. Con A肝损伤小鼠肝脏T细胞和NKT细胞表面ST2L表达升高流式细胞术检测发现,尾静脉Con A注射后小鼠肝脏浸润的T细胞、NKT细胞表面ST2L表达升高,至12-24h达峰值,48h后回落。将MNC在体外分别与Con A或IL-33培养,发现Con A可诱导ST2L表达升高,而IL-33无此效应。5.抗IL-33抗体对小鼠Con A所致肝损伤的保护作用与NKT细胞、IFN-γ相关应用清除NK细胞的小鼠建立Con A所致肝损伤模型,发现抗IL-33抗体预处理具有保护作用;但应用同时清除NK和NKT细胞的小鼠重复上述实验,则抗IL-33抗体未显示保护作用。对IFN-γ基因敲除鼠给予IL-33和Con A处理,发现与Con A单独处理的IFN-γ-/-小鼠相比,IL-33并未加重Con A所致肝损伤。6.sST2质粒预处理可减轻Con A所致小鼠肝损伤将含sST2目的基因的质粒(psST2-Fc)注入小鼠体内,可减轻肝损伤,而空载质粒(pcDNA3.1)无此作用。同时,psST2-Fc预处理可明显降低注射致死剂量Con A小鼠的死亡率。结论1.IL-33参与Con A所致小鼠肝损伤。2.给予外源性IL-33,可加重小鼠Con A所致肝损伤;抗IL-33抗体预处理可减轻Con A所致肝损伤。3.IL-33参与Con A所致肝损伤的机制可能与其抑制NKT细胞活化及IFN-γ分泌的作用有关。


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