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外源性降钙素通过上调子宫内膜上皮细胞β3表达促进胚泡植入

熊婷  
【摘要】:目的胚泡着床障碍是导致辅助生殖技术临床妊娠率低的最主要原因之一。有研究表明降钙素特异表达于植入窗期子宫内膜组织中,并在胚泡植入过程中起到重要作用。本研究将探讨外源降钙素(calcitonin, CT)通过影响子宫内膜容受性从而对植入效率的影响及可能的机制。方法采用贯序皮下注射雌、孕激素的方法建立子宫内膜容受性小鼠模型;分别用实时定量RT-PCR、Western-Blot、免疫组织化学、流式细胞术和ELISA检测8个与着床相关因子的基因及蛋白表达水平;利用JAR滋养细胞和RL95-2上皮细胞株建立内膜—滋养细胞相互作用的体外模型,观察JAR细胞球在经过不同处理的单层内膜上皮细胞(EEC)上的黏附和铺展;小鼠胚泡移植实验检测外源性降钙素对胚泡植入率的影响。结果(1)腹腔注射降钙素可明显提高容受期小鼠子宫内膜中β3、HB-EGF和LIF的表达。(2)体外培养时100μM降钙素可通过PKC途经促进RL95-2细胞中β3和细胞膜表面αvβ3的表达。(3)在细胞外基质(ECM)存在的情况下,降钙素通过促进αvβ3进一步促进RL95-2细胞中HB-EGF和LIF的表达。(4)在JAR细胞球与RL95-2细胞共培养体系中,JAR细胞在经降钙素处理的EEC上的粘附率明显大于未处理组;calphostin C预处理EEC,明显抑制降钙素对JAR细胞球的黏附能力的促进作用。(5)JAR细胞在经降钙素处理的EEC上的铺展扩大倍数明显大于未处理组;在与matrigel共同作用下,降钙素的促进作用最显著;calphostin C预处理EEC,明显抑制降钙素对JAR细胞球的铺展侵入能力的促进作用。(6)胚泡移植前腹腔注射降钙素可有效提高小鼠胚泡的植入效率。结论植入前期应用外源性降钙素可能通过对子宫内膜上皮细胞的作用提高内膜容受性,从而促进胚泡植入效率。本文研究结果可能提示一种在IVF-ET中促进子宫内膜容受状态的新方法,从而提高辅助生殖技术的成功率。


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