收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

CAFs经Notch信号通路诱导肝癌细胞“干性”的机制研究

熊思  
【摘要】:目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球第五大癌症且严重威胁我国人民的生命健康,肝癌的异质性及一小撮“干细胞”的存在导致其容易术后复发转移率。新近研究表明肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)可能参与肿瘤干细胞(cancer stem cell)的诱导与维持。肿瘤微环境重要组分肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)能诱导肿瘤细胞的“干性”,而Notch信号通路常介导肿瘤微环境与肿瘤细胞间的相互作用,我们的前期研究表明Notch信号通路能够维持CD90+肝癌干细胞的“干性”并且CAFs能够激活肝癌细胞的Notch信号通路。在肝癌中CAFs是否参与其“干性”的诱导和维持?Notch信号通路在CAFs诱导肝癌细胞“干性”中的作用如何?其确切的分子机制如何?本研究旨在深入阐明CAFs激活Notch信号通路诱导肝癌细胞“干性”的关键分子位点,可从肿瘤微环境与肿瘤干细胞这一角度为肝癌的转移复发提供新的靶向治疗策略并完善肝癌的复发转移机制。方法:我们首先从新鲜肝癌标本中提取并鉴定CAFs,建立CAFs与肝癌细胞的共培养体系,并通过NOD/SCID小鼠皮下成瘤、Transwell、平板克隆及浮球实验来检测肝癌细胞的“干性”特征,通过RT-PCR及Western blot来检测“干性”相关基因(Nanog,Sox2和Oct4)的表达差异。接着我们使用蛋白芯片及Elisa实验检测CAFs培养液中细胞因子的分泌情况,筛选出表达量最大的细胞因子IL6,并通过细胞因子调控实验检测IL6对肝癌细胞“干性”及Notch信号通路的影响。然后采用Notch1-sh RNA慢病毒载体及γ-分泌酶抑制剂(RO4929097)在基因及蛋白水平抑制MHCC-97H肝癌细胞中的Notch信号通路,检测阻断Notch信号通路后,CAFs及IL6对肝癌细胞“干性”的诱导作用。在确认CAFs分泌IL6激活Notch信号通路的基础上,使用STAT3的磷酸化抑制剂Cryptotanshinone抑制MHCC-97H肝癌细胞中STAT3的磷酸化,观察IL6对肝癌细胞“干性”及Notch信号通路的作用,解析IL6激活Notch信号通路的分子机制。最后将88对肝癌标本做成组织芯片,检测CAFs相关分子α-SMA和Notch信号通路关键分子NICD在肝癌标本中的表达并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:(1)通过与CAFs共培养,HLE和MHCC-97H细胞的成球能力、克隆形成能力、侵袭转移能力和NOD/SCID小鼠皮下成瘤能力显著增强;western blot及q RT-PCR结果显示:CAFs上调HLE和MHCC-97H细胞干性基因(Nanog、Sox2和Oct4)及Notch信号通路关键分子(Notch1、NICD和Hes1)的表达。(2)蛋白芯片结果显示MHCC-97H细胞与CAFs共培养后,CAFs分泌量最大的细胞因子是IL6,而MHCC-97H细胞中IL6的分泌量很小。通过细胞因子调控实验,我们发现IL6能增强MHCC-97H细胞的成球能力、克隆形成能力、侵袭转移能力和NOD/SCID小鼠皮下成瘤能力。(3)CAFs与MHCC-97H细胞共培养及IL6刺激MHCC-97H细胞后,Notch信号通路关键分子(Notch1、NICD和Hes1)的表达升高,下调MHCC-97H细胞的Notch信号通路能显著抑制CAFs和IL6对MHCC-97H细胞成球能力、增殖能力、侵袭转移能力和NOD/SCID小鼠成瘤能力的促进作用;MHCC-97H细胞中Notch信号通路被抑制后,CAFs和IL6不能上调MHCC-97H细胞干性基因(Nanog、Sox2和Oct4)及Notch信号通路关键分子(Notch1、NICD和Hes1)的表达。(4)抑制Stat3的磷酸化能阻断CAFs和IL6激活MHCC-97H细胞的Notch信号通路,并抑制CAFs和IL6对MHCC-97H细胞的成球能力、增殖能力、侵袭转移能力和NOD/SCID小鼠成瘤能力的促进作用。(5)免疫组织化学(IHC)检测显示:α-SMA和Notch信号通路关键分子NICD在肝癌标本中的表达明显高于癌旁组织,NICD在肝癌组织细胞核中的表达与门静脉癌栓形成及淋巴结转移明显相关。结论:(1)CAFs能够诱导肝癌细胞的自我更新、侵袭转移及体内外成瘤等“干性”特征并上调肝癌细胞中“干性”相关基因(Nanog,Sox2和Oct4)的表达;(2)CAFs能够分泌大量的IL-6,并通过IL6诱导肝癌细胞的“干性”特征。(3)IL-6可以通过STAT3 Tyr705磷酸化激活肝癌细胞的Notch信号通路,Notch信号通路激活后肝癌细胞的“干性”特征明显增强。(4)Notch信号通路关键分子NICD可以作为潜在的预测肝癌患者预后的指标。肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存的内在环境,该研究从肿瘤微环境与肿瘤干细胞这一角度完善肝癌干细胞的调控机制,可望为彻底消灭肝癌干细胞及肝癌防治提供新的思路。由于时间有限我们只研究了CAFs分泌量最大的细胞因子IL6对肝癌细胞“干性”的影响,在之后的研究中我们将探索CAFs分泌的多种细胞因子及肿瘤微环境中的多种细胞对肝癌细胞“干性”的联合作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 郭冬梅;李斑斑;李纯璞;滕清良;;Notch信号通路参与急性移植物抗宿主病的研究进展[J];中国实验血液学杂志;2017年01期
2 冷冬;王建章;宋保强;;烧伤创面内Notch信号因子变化临床研究[J];临床军医杂志;2017年04期
3 付超;李勇;李立峰;肖婷婷;马翔宇;张碧;;雌激素缺乏对骨关节炎中Notch信号的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2017年04期
4 冯亮;向明;刘辉;王伟青;楚晓;;NOTCH信号在胸骨后甲状腺肿中的表达及其作用的研究[J];中国地方病防治杂志;2016年12期
5 季施燕;徐正府;黄华;鄂群;周国雄;;Notch受体在胃癌的表达及意义[J];江苏医药;2016年01期
6 高增法;吴永娜;李汛;;Notch信号通路与肝癌的研究进展[J];基础医学与临床;2016年04期
7 Xu Yanli;Zhu Feiye;Xu Shan;Liu Luming;;Anti-tumor effect of the extract from Qingyihuaji formula on pancreatic cancer by down-regulating Notch-4 and Jagged-1[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年01期
8 张聃;詹新立;;Notch信号通路在骨肉瘤研究中的新进展[J];临床骨科杂志;2015年05期
9 常锦超;;Knuckles & Notch:艺术书狂热分子[J];艺术与设计;2017年08期
10 彭功玲;田野;逯翀;郭辉;赵向旺;郭雅文;王龙强;杜秋丽;刘春萍;;Effects of Notch-1 Down-regulation on Malignant Behaviors of Breast Cancer Stem Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期
11 Xiao Du;Zhong Cheng;Yi-Han Wang;Zi-Heng Guo;Si-Qin Zhang;Jian-Kun Hu;Zong-Guang Zhou;;Role of Notch signaling pathway in gastric cancer: A meta-analysis of the literature[J];World Journal of Gastroenterology;2014年27期
12 Soomin Ahn;Jiyeon Hyeon;Cheol-Keun Park;;Notch1 and Notch4 are markers for poor prognosis of hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2013年03期
13 ;Effect of Trastuzumab on Notch-1 Signaling Pathway in Breast Cancer SK-BR3 Cells[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年03期
14 Ling-Yun Guo;Yu-Min Li;Liang Qiao;Tao Liu;Yuan-Yuan Du;Jun-Qiang Zhang;Wen-Ting He;Yong-Xun Zhao;Dong-Qiang He;;Notch2 regulates matrix metallopeptidase 9 via PI3K/AKT signaling in human gastric carcinoma cell MKN-45[J];World Journal of Gastroenterology;2012年48期
15 ;Late SV40 factor:A key mediator of Notch signaling in human hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2011年29期
16 钟加滕;焦丹;杨冬艳;;Notch信号途径与肾细胞癌发生发展的相关性研究[J];中国实验诊断学;2010年07期
17 钟加滕;刘菲;衣豪伟;孙琳;于慧美;杨冬艳;;人肾细胞癌Notch信号途径相关基因的表达及其意义[J];中国实验诊断学;2010年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘雄伟;吴颖芳;朱冰玉;戴卓;;Notch1在口腔黏膜下纤维性变中的表达研究[A];2018年中华口腔医学会第十次全国口腔黏膜病学术大会暨第八次全国口腔中西医结合学术大会论文集[C];2018年
2 Jiang Huimin;;The Notch Signaling Pathway in Vascular Niche Promotes Stemness of Breast Cancer Cells through ZEB1[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年
3 Hao Liu;Ping Zhou;Fenglin Liu;Hong Lan;Yu-xiang Zhang;;Comparative analysis of Notch1 and Notch2 binding sites in the genome of cancer cells[A];中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议论文集[C];2016年
4 Jingzhe Yang;Yusen Jia;Chengli Wang;Zhijie Zhang;Yongxing Wang;Tao Kong;;Curcumin inhibits cell survival and migration by suppressionof Notch-1 activity in prostate cancer cells[A];第十次全国中西医结合男科学术大会、第六届广西中医、中西医结合男科学术大会、全国中西医结合男科疾病诊疗新进展学习班论文集[C];2015年
5 Jafary-Zadeh Mehdi;Wu Zhaoxuan;Wong W.H.;Zhang Yong-Wei;Montemayor Lauren C.;Gu X.Wendy;Chen David Z.;Greer Julia R.;Lee Seok-Woo;Srolovitz David J.;;Deformation and failure behavior of nanowires and nanolattices[A];中国力学大会-2015论文摘要集[C];2015年
6 张丽;梁英民;夏德雨;李国辉;蒋姗姗;谷芳娜;;Notch信号在急性早幼粒细胞白血病患者骨髓中的表达研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
7 ;Expression profile of Notch-related genes in multi-drug resistant K562/A02 cells compared with parental K562 cells[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 邹晓英;庄姮;岳林;高学军;;阻断Notch信号通路对人牙髓细胞增殖和老化的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
9 赵昱;侯丽宏;马磊;朱正华;朱萧玲;王强;吕岩;陈绍洋;;Electroacupuncture pretreatment induces the tolerance against focal cerebral ischemia through activation of Notch pathway[A];中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编[C];2011年
10 黄佳圆;王锐;陈龙邦;;Expression of Notch-1 and Its Clinical Significance in Different Histological Subtypes of Human Lung Adenocarcinoma[A];2013华东胸部肿瘤论坛暨第六届浙江省胸部肿瘤论坛论文集[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄崴;Geminin通过调控Fgf8和Notch信号协调Somite形成的分子机制研究[D];西南大学;2018年
2 熊思;CAFs经Notch信号通路诱导肝癌细胞“干性”的机制研究[D];华中科技大学;2018年
3 杜中波;肝细胞粘附分子(HepaCAM)通过下调Notch信号通路抑制去势抵抗性前列腺癌的恶性生物学行为[D];重庆医科大学;2018年
4 海龙;Notch1通路在各分子亚型GBM的表达及对NF-κB(p65)调控机制的研究[D];天津医科大学;2018年
5 欧超;miR-130b通过抑制Notch-Dll1表达促进肝细胞癌侵袭转移的机制研究[D];广西医科大学;2017年
6 王东;Notch及其介导的信号通路在乳腺肿瘤干细胞以及纯化三阴性乳腺肿瘤干细胞中的作用研究[D];中国科学技术大学;2018年
7 徐艺桐;KIAA0247通过Notch通路抑制非小细胞肺癌增殖,转移和侵袭的研究[D];中国医科大学;2018年
8 高娜;芪灯明目胶囊有效成分对高糖条件下Dll4/Notch-VEGF信号通路的调控作用及其抗血管生成机制的研究[D];成都中医药大学;2018年
9 徐沛然;HIF-1与Notch信号通路在胰腺癌变中相互调控机制的探究[D];北京协和医学院;2018年
10 李双娣;基于Notch-Dell4信号通路探讨宣痹通瘀胶囊保护心肌损伤及干预血管新生作用机制的研究[D];长春中医药大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王亮;miR-99b-5p介导Notch信号调控巨噬细胞活化的分子机制和靶向TAMs递送miR-99b-5p治疗肿瘤的初步探讨[D];中国人民解放军空军军医大学;2018年
2 张粉;Notch信号通路调节的肝细胞周期参与肝部分切除术后肝再生及其机制[D];中国人民解放军空军军医大学;2018年
3 洪广亮;整合miRNA和mRNA表达谱研究Notch1对猪骨骼肌卫星细胞增殖与分化的调控[D];华南农业大学;2017年
4 王南;Notch通路调控JunB的表达抑制BMP9诱导间充质干细胞成骨分化[D];重庆医科大学;2018年
5 李湾湾;microRNA簇miR-2~13~71通过Notch调控飞蝗的卵黄生成与卵母细胞成熟[D];河南大学;2018年
6 董广通;养阴清肺活血法调控Notch1/Jagged1防治放射性肺纤维化的机制研究[D];中国中医科学院;2018年
7 夏雪皎;疏肝健脾活血方调控HSC-SEC共培养Notch通路的作用机制研究[D];浙江中医药大学;2018年
8 张创;小檗碱抗肿瘤活性筛选及作用机制研究[D];郑州大学;2018年
9 李润;Notch信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导小胶质细胞激活中的作用研究[D];昆明医科大学;2018年
10 周灵通;固本增骨方含药血清调节Notch通路干预大鼠BMSCs成骨分化的机制研究[D];甘肃中医药大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 ;为什么心在左肝在右?[N];新华每日电讯;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978