收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

miRNA-342-3p通过Hedgehog信号通路促成骨分化的机制研究

青莹  
【摘要】:目的:Hedgehog(Hh)信号通路不仅是胚胎发育时期骨骼形成及发育的重要传导途径,还能双向调控出生后的骨组织,维持内环境的稳定性。Sonic Hedgehog(Shh)是Hh信号通路的最重要的配体之一,越来越多的证据表明,Shh通路在成骨过程中起着重要作用。融合蛋白抑制剂(Suppressor of fused protein,Sufu)是Shh信号通路的抑制蛋白,负调节Hh信号通路的转录因子Gli。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)是近期应用较多的一类干细胞,可用于细胞再生和干细胞治疗。miRNA-342-3p在人体多个组织中均有表达,在原发骨髓纤维变性其表达水平大幅下调,而在多发性骨髓瘤中高表达,迄今为止并未见骨相关细胞内miRNA-342-3p研究的报道。在本项目中,我们致力于探讨miRNA-342-3p是否通过Sufu/Gli信号轴,在Hh信号通路的成骨效应中发挥调控作用。方法:我们对诱导hUCMSCs成骨细胞分化过程中表达的miRNA进行高通量测序分析,检测其表达量的变化,并验证了对成骨细胞生成过程中高表达的miRNA。预测miRNA-342-3p可能作为关键因子通过Hh信号通路调控成骨过程。然后我们分别构建过表达miRNA-342-3p的慢病毒载体和抑制miRNA-342-3p的慢病毒载体,分别转导hUCMSCs。通过RT-PCR和蛋白水平检测观察过表达或沉默miRNA-342-3p时细胞内Hh信号通路及成骨相关因子的表达变化。继而应用荧光素酶报告基因活性检测,分析miRNA-342-3p对Sufu有无靶作用。同时在过表达Sufu转染的hUCMSCs中加入miRNA-342-3p过表达或抑制表达病毒,观察Hh信号通路及成骨相关因子的表达变化及细胞成骨分化程度,以此进一步分析miRNA-342-3p对Sufu的靶作用。最后我们将过表达miRNA-342-3p或Sufu的重组病毒转导hUCMSCs后复合骨移植材料β-TCP,植入大鼠颅骨骨缺损处,体内观察miRNA-342-3p是否通过Sufu调控Hh信号通路从而促进骨再生。结果:通过miRNA高通量测序和RT-PCR验证,预测miRNA-342-3p可能作为关键因子(P0.02)通过Hh信号通路调控成骨过程。软件预测miRNA-342-3p可能靶向Sufu,通过调节Hh信号通路来调节成骨。然后构建过表达和抑制表达miRNA-342-3p慢病毒转染hUCMSCs,验证了miRNA-342-3p可以激活Hh信号通路,其中Smo(P0.01),Gli1(P0.01),Gli2(P0.01),Gli3(P0.05),同时也促进成骨相关因子的表达,ALP(P0.01),Cbfa1(P0.05),OPG(P0.01),TGF-β(P0.01)。继而进一步构建了Sufu过表达质粒,双荧光素酶检测实验验证miRNA-342-3p和Sufu的靶向关系(P0.01)。RT-qPCR和蛋白水平检测进一步验证了两者的相反的作用趋势(P0.01)。我们的结果中还有个有趣的现象,TGF-β在成骨过程中表达水平也有显著变化(P0.01),可能证明Hh信号通路与TGF-β信号通路共同调节成骨过程。最后在体内实验中,填充过表达miRNA-342-3p细胞材料复合物实验组骨组织显著增生(BV/TV,P0.01),进一步验证了我们的体外实验结果。结论:本研究的结果将有助于进一步探讨Hh信号通路在骨改建中的作用机制,并筛选出并验证了新的调控因子miRNA-342-3p作为靶分子对骨改建过程进行精准调控,为种植义齿骨组织工程提供新的治疗思路。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 范久亿;李军;丁士刚;;Wnt信号通路在结直肠侧向发育型肿瘤中的研究进展[J];胃肠病学;2018年11期
2 王雪;张评浒;;Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J];中国药科大学学报;2017年01期
3 许莹萍;王菲菲;李大金;王凌;;雌激素-雌激素受体信号通路对趋化因子的调控作用研究进展[J];生殖医学杂志;2017年09期
4 苏依拉其木格;;Hedgehog信号通路在肺癌中的研究进展[J];健康之路;2016年09期
5 滕振平;邢飞跃;;细胞外信号调节激酶1/2信号通路对B淋巴细胞的影响[J];中国药物与临床;2007年01期
6 杜婵;姜保国;;许旺细胞增殖和分化过程中的信号通路[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年03期
7 王虹;陈晓云;宁静;刘欣;田春莲;刘明春;;黄酮类化合物对免疫相关信号通路的调控作用研究进展[J];动物医学进展;2019年12期
8 史琳琳;赵锋;高学军;李庆章;;乳蛋白合成信号通路的研究进展[J];中国畜牧兽医;2013年01期
9 林建国;刘冰冰;梁飞;范杞森;潘晓燕;肖晓山;;JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响[J];新医学;2020年01期
10 舒扬;向敏;;Wnt信号通路在中枢神经系统中的作用及相关机制[J];江苏医药;2018年08期
11 刘晓光;陈佩杰;肖卫华;;Wnt信号通路在骨骼肌损伤修复过程中的作用及机制研究[J];生命的化学;2018年05期
12 刘艳芳;吴志远;;分子信号通路在瘢痕疙瘩中的研究进展[J];海南医学;2017年07期
13 郭龙;张春媚;高勇;赵忠岩;;ARDS发病机制的相关信号通路研究进展[J];中国实验诊断学;2017年09期
14 樊姿影;曾昊蓝;张世鹰;卢芳国;杨胜辉;;P38MAPK信号传导通路在HF治疗中的应用[J];环球中医药;2015年S1期
15 黄朝帅;陈二涛;冯东福;;神经干细胞增殖和分化相关信号通路的研究进展[J];临床神经外科杂志;2013年04期
16 张陶涛;王小竞;邢向辉;;牙根发育启动相关信号通路的研究进展[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2011年09期
17 许永安;付小兵;;毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路研究进展[J];中国修复重建外科杂志;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 彭丽;章杰;刘伟;;病理性瘢痕相关信号通路的研究进展[A];2015江西省首届医学美容整形联合学术会议、江西省医学会第十一次医学美学与美容学术研讨会、江西省第四次中西医结合医学美容学术会议论文汇编[C];2015年
2 孔祥辉;孙朝晖;黄晓军;;p38 MAPK信号通路与勃起功能障碍的相关研究进展[A];首届男性大健康中西医协同创新论坛暨第三届全国中西医结合男科青年学术论坛论文集[C];2019年
3 王尚琦;刘静;刘超;肖晶;;BMP信号通路产生贯通性腭裂的机制研究[A];2019年中华口腔医学会口腔病理学专业委员会第十三次全国口腔病理学术会议论文汇编[C];2019年
4 曾令启;叶章群;陈志强;杨为民;高文喜;;草酸激活人肾小管上皮细胞p38 MAPK信号通路的研究[A];中国中西医结合学会泌尿外科专业委员会第十四次全国学术会议暨2016年广东省中西医结合学会泌尿外科专业委员会学术年会论文集[C];2016年
5 王俊成;;炎症因子对成骨细胞分化过程中BMP信号通路的的影响[A];中华口腔医学会口腔修复学专业委员会第十次全国口腔修复学术大会论文集[C];2016年
6 苟黎明;李春洁;李龙江;;经典Wnt信号通路在下颌下腺分支形态发生过程中的作用与机制的初步研究[A];2017全国口腔颌面——头颈肿瘤外科学术研讨会论文集[C];2017年
7 谢玲;项晓琼;胡迎春;范宝星;霍艳英;李邦印;段瑞峰;张开泰;吴德昌;;细胞定位与信号通路检测技术在hrnt-1基因功能研究中的应用[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全国中青年学术交流会论文汇编[C];2001年
8 苟黎明;李春洁;李龙江;;经典Wnt信号通路在下颌下腺分支形态发生过程中作用与机制的初步研究[A];第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编[C];2018年
9 林泓域;Yimon Aye;;Wnt信号通路与Nrf2信号通路之间的微妙关系——靶向化学平台T-REX在氧化还原信号通路研究方面的应用[A];第十届全国化学生物学学术会议论文摘要集(墙报)[C];2017年
10 张丽琳;常娜;蒋伶活;;镉胁迫下MAPKs信号通路的应答机制初探[A];第九届中国模式真菌研讨会摘要集[C];2016年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 闻乃妍;溴结构域抑制剂JQ1通过VEGF/PI3K/AKT信号通路促进脑胶质瘤干细胞周期阻滞和凋亡[D];吉林大学;2019年
2 青莹;miRNA-342-3p通过Hedgehog信号通路促成骨分化的机制研究[D];华中科技大学;2019年
3 陈玲丽;RhoA/ROCK信号通路在氟致小鼠智力损伤中的作用及其机制[D];山西农业大学;2018年
4 胡奕;RACK1调控NF-κB信号通路在幽门螺杆菌感染致癌中的作用及机制[D];南昌大学;2019年
5 刘佳;miR-338-3p通过调控AKT信号通路抑制皮肤炎症及肺癌发展的研究[D];东北林业大学;2018年
6 张辉;Erythropoietin信号通路对成体大鼠脊髓内源性神经干细胞增殖分化作用的实验研究[D];安徽医科大学;2018年
7 吴慧;活性多肽的表达及功能研究[D];国防科学技术大学;2017年
8 韩晶晶;Nrf2信号通路在急性移植物抗宿主病中的作用及机制研究[D];苏州大学;2018年
9 朱建伟;MAPK/纤调蛋白信号通路在氧化应激介导慢性胰腺炎纤维化中的机制研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年
10 孙海涛;NF-κB P65通过Wnt信号通路调控HSCs活化的分子机制及鳖甲寡肽I-C-F-6的干预作用[D];南方医科大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 白贵斌;Shh/p53/NF-κB信号通路在小鼠肺脏AECⅡ中抗BCG感染的免疫调控作用[D];宁夏大学;2019年
2 衣凯宁;EZH2蛋白在ATL细胞中调控TGF-β信号通路的作用及其分子机制的研究[D];浙江师范大学;2019年
3 王雍;YAP蛋白通过调控TGF-β信号通路促进成人T细胞白血病发生的机制研究[D];浙江师范大学;2019年
4 谭莹;利用CRISPR/Cas基因筛选技术研究Wnt/β-catenin信号通路的调控因子[D];哈尔滨工业大学;2019年
5 关凯方;乳源MFG-E8介导MAPK信号通路调控及对衰老大鼠肌肉再生作用[D];哈尔滨工业大学;2019年
6 刘璐;通过抑制ERK上调Nrf2-ARE信号通路促进创伤性脑损伤后神经功能恢复[D];中国医科大学;2019年
7 方婷婷;激活Sting信号通路对GL261小鼠肿瘤模型远隔免疫效应的影响[D];扬州大学;2019年
8 刘璐;PD-1/PD-L1免疫抑制轴激活外周T细胞淋巴瘤胞内癌基因信号通路的探索及其对患者预后影响的初步研究[D];天津医科大学;2019年
9 卢陶陶;基于Cdk5/p25信号通路的黄连素调控Aβ产生和聚集的机制[D];安徽中医药大学;2019年
10 刘付翠;杂交鳢TCR信号通路相关基因克隆表达及功能初探[D];上海海洋大学;2019年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 白毅;mTOR信号通路为肿瘤治疗提供新靶点[N];中国医药报;2010年
2 记者 王丹;最强激光“照亮”药靶重要信号通路[N];健康报;2015年
3 ;完美实现信号通路间的自由切换[N];通信产业报;2008年
4 本报特约撰稿 樊平;肿瘤信号通路靶点研发线吸睛[N];医药经济报;2018年
5 衣晓峰 陈英云 记者 李丽云;结肠癌发生中新的信号通路找到[N];科技日报;2009年
6 东南大学附属中大医院 刘必成 李作林;从缺氧调适机制谈疾病的治疗[N];健康报;2019年
7 刘海英;美发现两种细胞信号通路互动机制[N];科技日报;2009年
8 衣晓峰;哈医大发现结肠癌发生中新的信号通路[N];中国医药报;2009年
9 记者 刘海英;英发现细胞信号通路新“刹车”蛋白[N];科技日报;2012年
10 中山大学肿瘤医院血液肿瘤科 吕跃 王华;难治性HL研究砥砺前行[N];医药经济报;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978