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髓样细胞表面触发受体-1与子痫前期发生发展的相关性研究

谢荫  
【摘要】:背景子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期常见的并发症之一,严重危害母儿健康。母体全身性炎症反应的过度激活被认为是PE发生发展中的重要环节之一。髓样细胞表面触发受体-1(The triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)是免疫球蛋白超家族的成员之一,是天然免疫反应的主要放大器,参与机体内炎症状态的发展和持续。有研究表明早发型重度PE中TREM-1表达上调,且可能参与滋养细胞的分化,但TREM-1是否通过调控胎盘炎性因子的释放从而参与PE的病理生理过程目前尚无相关报道。目的比较PE患者与正常孕妇胎盘组织中TREM-1及炎性因子的表达差异,探究TREM-1与PE发病的相关性,并揭示TREM-1在PE发生发展中的作用及机制。方法1.收集PE患者和正常孕妇胎盘组织各20例,通过免疫组织化学染色、western blotting和real time-PCR检测胎盘组织中TREM-1的定位和表达,并比较其在PE患者与正常孕妇胎盘组织中的差异。2.Real time-PCR比较PE患者和正常孕妇胎盘组织内炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βm RNA水平的表达差异。3.细胞免疫荧光检测TREM-1在TEV-1细胞上的表达及定位。4.构建TREM-1质粒和靶向TREM的si RNA,分别转染TEV-1细胞,构建过表达和沉默TREM-1的滋养细胞模型,LPS刺激模拟炎症环境,将细胞分为四组:(1)Blank组(未给予任何处理)、(2)LPS组(未转染细胞,LPS处理24h)、(3)TREM-1+LPS组(TREM-1质粒转染24h后,LPS处理24h)(4)si TREM-1+LPS组(si TREM1转染细胞24h后,LPS处理24h)。5.Western blotting检测四组细胞TREM-1及NF-κB通路关键蛋白p-IκBα及NF-κBp65蛋白表达水平。6.Real time-PCR检测四组细胞炎性因子IL-6、IL-8、TNFα和IL-1βm RNA水平。结果1.胎盘组织中绒毛滋养细胞及绒毛外滋养细胞均表达TREM-1。与正常妊娠组比较,TREM-1蛋白、m RNA在PE组胎盘中表达升高,差异具有统计学意义(p0.01)。2.与正常妊娠组比较,PE组胎盘组织中的炎性因子IL-6、IL-8、TNFα和IL-1βm RNA表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。3.TREM-1在TEV-1细胞胞浆、胞膜、胞核均有分布。4.与Blank组相比,LPS组TEV-1细胞中TREM-1蛋白、p-IκBα蛋白及细胞核内NF-κB p65蛋白表达增加,胞浆内NF-κB p65蛋白表达减少,炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βm RNA的表达增加,差异均有统计学意义(p0.05)。5.与LPS组相比,TREM-1+LPS组p-IκBα、细胞核内NF-κB p65蛋白及炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βm RNA表达增加,胞浆内NF-κB p65蛋白表达减少;si TREM-1+LPS组p-IκBα、细胞核内NF-κB p65蛋白及炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βm RNA表达减少,胞浆内NF-κB p65蛋白表达增加,差异均有统计学意义(p0.05)。结论本研究结果提示TREM-1在PE孕妇胎盘组织中表达上调,并可能通过激活滋养细胞内NF-κB通路,促进下游炎性因子的生成,从而发挥促炎作用,促进PE的发生发展。


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