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泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理

张晨晓  
【摘要】:泥鳅(Misgurnus angillicaudatus Cantor)是我国重要的名优经济鱼类,属鳅科动物,全体和皮肤分泌的滑液可以入药,其药用功效收载于《中药大词典》。其主要功效为补脾益气、消热解毒、消痞散结、祛湿邪、治消渴、水肿黄疸、痢疾、阳痿等症。民间常用其粘液治痈肿、中耳炎,用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌、骨髓炎等。近代用泥鳅散治疗传染性肝炎,效果显著。我们课题组从泥鳅粘液中分离纯化得到一种泥鳅多糖,对它的结构特征、生物活性如抗肿瘤活性、免疫作用等进行了研究,但其机理不清楚。本文在细胞水平上对泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的机理进行了研究。主要结果如下: 1) 从小鼠中分离得到脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,研究了泥鳅多糖对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞增殖活性的影响,研究发现泥鳅多糖可以促进小鼠脾脏淋巴细胞和巨噬细胞的增殖,同时发现泥鳅多糖的最佳作用剂量为30μg/ml。进一步对脾脏淋巴细胞的T 淋巴细胞群和B 淋巴细胞群研究发现,泥鳅多糖促进T 淋巴细胞群的增殖,而对B 淋巴细胞群几乎没有影响。应用RT-PCR 技术进一步研究了泥鳅多糖对T 淋巴细胞分泌的细胞因子IL-2、IL-4、IL-6 和IFN-γ的影响,结果发现泥鳅多糖作用的靶细胞中主要是T 细胞的Th1 细胞亚群。泥鳅多糖可以提高巨噬细胞分泌的细胞因子IL-6 和TNF-α的表达水平,促进iNOS 的mRNA 表达水平,提高的iNOS 进而诱导细胞产生NO。这些结果说明泥鳅多糖能提高免疫细胞的免疫调节作用,并且作用的靶细胞是T 淋巴细胞和巨噬细胞,而对B 淋巴细胞没有影响。 2)为了研究泥鳅多糖的抗肿瘤活性,研究了泥鳅多糖对两种肿瘤细胞株人早幼粒性白血病细胞株HL-60 和人肝癌细胞株SMMC-7721 的作用。应用MTT 法及检测乳酸脱氢酶漏出率的方法研究泥鳅多糖对肿瘤细胞增殖活性的影响,结果发现泥鳅多糖可以抑制肿瘤细胞HL-60 和SMMC-7721 细胞的增殖。细胞形态学观测泥鳅多糖可以诱导细胞出现凋亡的形态学特征,提取泥鳅多糖处理的细胞DNA,琼脂糖凝胶电泳结果发现细胞内DNA 出现DAN Ladder,流式细胞术检测发现泥鳅多


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