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NOTCH信号分子在急性胰腺炎中表达及意义的实验研究

张维康  
【摘要】:第一部分 NOTCH信号分子在轻重两种类型急性胰腺炎中表达差异的研究 [目的] 研究NOTCH信号系统两个节点分子NOTCH-1和HES-1在轻重两种不同类型急性胰腺炎表达的差异。 [方法] 用不同浓度的牛黄胆酸钠逆行胆胰管注射分别建立急性轻型胰腺炎及急性重型胰腺炎模型,采用Western blot及Real-time PCR的方法检测胰腺组织NOTCH-1和HES-1的蛋白和mRNA在不同类型急性胰腺炎、不同时相表达水平差异。 [结果] ①自造模后4小时,两组的NOTCH-1和HES-1的蛋白及mRNA表达水平均明显上调;②急性重型胰腺炎组的NOTCH-1、HES-1蛋白及mRNA的表达明显高于急性轻型胰腺炎组,二组之间相比有显著差异(P<0.01);③急性轻型胰腺炎组NOTCH-1和HES-1表达的峰值时间是造模后12小时,而急性重型胰腺炎组NOTCH-1和HES-1表达的峰值时间是造模后8小时;④HES-1表达上调的程度在两组均高于NOTCH-1。 [结论] ①在急性胰腺炎中,NOTCH信号系统有放大效应;②NOTCH信号系统表达上调的程度和时间与急性胰腺炎的严重程度相关;③NOTCH信号系统表达的上调可能与急性胰腺炎组织损伤后的再生和修复有关。 第二部分 急性胰腺炎细胞凋亡与NOTCH信号分子表达的实验研究 [目的] 探讨细胞凋亡与NOTCH信号分子在急性胰腺炎中的可能关系。 [方法] 采用TUNEL法检测不同类型急性胰腺炎在不同时相的细胞凋亡指数;采用Western blot及Real-time PCR的方法检测胰腺组织NOTCH-1和HES-1的蛋白和mRNA在不同类型急性胰腺炎、不同时相表达水平差异。 [结果] ①急性轻型胰腺炎组在造模后4小时至24小时内凋亡指数变化无明显差异;②急性重型胰腺炎组在造模后4小时凋亡指数最高,其后逐渐下降;③急性轻型胰腺炎组细胞凋亡指数明显高于急性重型胰腺组(P<0.01)。④急性重型胰腺炎组的NOTCH-1和HES-1蛋白及mRNA的表达明显高于急性轻型胰腺炎组,二组之间相比有显著差异(P<0.01);⑤在急性重型胰腺炎中,NOTCH信号分子表达的峰值时间滞后于细胞凋亡的峰值时间。 [结论] ①细胞凋亡指数及NOTCH信号分子的表达在不同类型急性胰腺炎均有明显差异;②在急性轻型胰腺炎时,NOTCH信号分子的表达与胰腺细胞凋亡的关系不明显,其表达水平的上调可能主要是组织损伤后的再生和修复信号;③在急性重型胰腺炎时,NOTCH信号分子表达的可能抑制细胞凋亡,使胰腺细胞的死亡以坏死的方式进行。 第三部分 激活NOTCH信号抑制腺泡细胞凋亡的作用研究 [目的] 构建真核表达载体pcDNA3.0-NICD,从而研究NOTCH-1受体活性部分(NICD)对腺泡细胞凋亡的影响。 [方法] 构建真核表达载体pcDNA3.0-NICD,并将其转染胰腺腺泡细胞株AR4-2J,用雨蛙素诱导细胞凋亡,比较转染前后腺泡细胞的凋亡指数。 [结果] 经内切酶双酶切和DNA测序均证明目的基因正确克隆入pcDNA3.0质粒中,将该重组子转染腺泡细胞后,经雨蛙素诱导的腺泡细胞凋亡率明显下降。 [结论] ①成功构建了pcDNA3.0-NICD真核表达载体。②NOTCH-1受体活性部分可以抑制胰腺腺泡细胞凋亡。


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