收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

肿瘤细胞基质金属蛋白酶活性的动态光学成像

杨杰  
【摘要】: 基质金属蛋白酶(Matrix Metaloproteinases,MMPs)是一种可降解细胞外基质的蛋白水解酶,在恶性肿瘤的生长、侵袭、转移和血管生成过程中起着重要的作用。基质金属蛋白酶抑制剂作为新型抗肿瘤药物,在肿瘤治疗方面具有良好的开发与应用潜力。建立实时在体检测MMPs活性的方法,对于高通量在体筛选MMPs抑制剂具有重要的作用。1 应用基因工程技术合成用于在体检测水解酶活性的荧光共振能量转移(FRET)探针,通过FRET成像能动态监测在体外和不同细胞表达水解酶的活性。本研究中应用基因工程技术合成了两对可用于在活细胞或活动物体内检测MMPs活性的荧光共振能量转移(FRET)探针,此FRET探针设计原理为:将能发生FRET的荧光蛋白对CFP/YFP或CFP/DsRed用MMPs识别的肽相连,构建成YFP-MMPs底物识别序列-CFP或DsRed- MMPs底物识别序列-CFP的融合蛋白。在体外利用纯化的荧光探针对MMP酶的活性及抑制剂的作用进行了实时动态的光谱学分析,而且此探针对MMP2具有较高的酶切特异性。将这两个探针用展示技术锚定在细胞膜的外表面,用于检测分泌到细胞外的MMPs活性。当细胞外液无MMPs时,此FRET探针保持其完整性时,CFP与YFP或CFP与DsRed之间能够发生荧光共振能量转移;当肿瘤细胞高表达MMPs,分泌到细胞外液中的MMPs活性较高时,FRET探针被MMPs裂解,使得荧光受体蛋白YFP或DsRed游离到细胞外液中,而荧光供体蛋白CFP仍保留在肿瘤细胞上。因此,无论是通过FRET荧光成像还是单独检测YFP或DsRed荧光信号,均能灵敏地反映肿瘤细胞的MMPs活性。本研究中,将此FRET探针分别转染到MDA-MB 435s细胞(高表达MMP s)和MCF-7细胞(低表达MMPs),筛选稳定表达荧光探针的细胞株,利用FRET技术在活细胞内实时监测了MMPs的活性及MMPs抑制剂GM6001的作用。此外,将稳定表达FRET探针DsRed- MMP识别序列-CFP的MDA-MB 435s细胞接种在无壳鸡胚尿囊膜上,通过监测DsRed和CFP的荧光比例信号在体反映肿瘤生长过程中的MMP活性,同时用MMPs抑制剂GM6001作用于肿瘤3天,发现消失的DsRed荧光信号明显增强,结果表明构建的FRET探针能够灵敏在体地检测金属蛋白酶的活性。因此,所构建的荧光探针可以灵敏地检测MMP的活性并用于MMP抑制剂的活体的抗癌药物的研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李华,王禄增,刘维全,崔振中,王太一;GFP-p16融合基因表达载体在BHK HeLa细胞中荧光蛋白表达的研究[J];中国实验动物学杂志;1998年01期
2 段小军,周跃,杨柳,何天佐,戴刚,陈光兴,李忠;应用荧光蛋白标记技术对体外构建组织工程软骨的监测[J];中国矫形外科杂志;2005年02期
3 段小军,杨柳,周跃,唐康来,陈光兴,董世武;不同荧光蛋白标记技术对兔骨髓基质干细胞体外增殖的影响[J];中华创伤骨科杂志;2004年07期
4 魏泉德,叶苓,徐劲,余新炳:;DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究[J];中国人兽共患病杂志;2001年05期
5 靳更林,郭建辉,马泓,孟麟;肿瘤及胚胎特异表达蛋白CEP65的真核细胞表达及其细胞定位[J];癌症;2005年05期
6 程远雄,钟南山;重组白细胞介素10-pEGFP-N2质粒构建及表达[J];第三军医大学学报;2001年02期
7 张蕾;金辉;田力;李伟伟;李鹏飞;;人甲状腺鳞癌细胞中端粒酶启动子功能分析[J];中国公共卫生;2011年02期
8 ;随时间变色的荧光蛋白[J];第一军医大学学报;2001年04期
9 司履生;现代免疫细胞化学和荧光图像技术[J];中华病理学杂志;2004年05期
10 杜红延,王捷,郭勇,郑霖,杨静,刘大志;骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及其在特异性骨转移乳腺癌细胞中的稳定表达[J];解放军医学杂志;2005年05期
11 刘阳子;倪士银;倪士峰;侯恩太;骆蓉芳;赵桂仿;;生物发光研究及其应用进展[J];西北药学杂志;2009年03期
12 刘志锋,姜勇;报告基因技术的理论基础及其应用[J];生理科学进展;2002年04期
13 李红乐,邢飞跃,孙学刚,曹永宽,宋革,张秀明,姜勇,李树浓;腺病毒介导的EGFP基因在大鼠骨髓间质干细胞中的高效表达[J];中国病理生理杂志;2003年03期
14 谢书阳;王萍玉;姚宝洪;焦飞;王桂兰;杨成;;应用珠蛋白启动子驱动荧光蛋白在K562细胞中表达[J];滨州医学院学报;2008年01期
15 李红乐,秦清和,王静珍,邓鹏,李树浓,姜勇;应用细菌同源重组法快速构建和制备重组腺病毒[J];中国病理生理杂志;2002年11期
16 潘炜华,廖万清,顾菊林,霍克克;新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建[J];中华微生物学和免疫学杂志;2002年03期
17 段小军,杨柳,周跃;荧光蛋白标记对兔骨髓间充质干细胞体外成脂诱导的影响[J];第三军医大学学报;2005年18期
18 段小军;杨柳;周跃;辛榕;李起鸿;;增强型绿色荧光蛋白标记技术对骨折后骨髓间充质干细胞的迁移示踪[J];中国修复重建外科杂志;2006年02期
19 田力;李伟伟;李鹏飞;张蕾;;人端粒酶启动子(hTERTp)真核表达载体的构建[J];辽宁医学院学报;2008年06期
20 余松涛;黎川;陈陵;汤旭东;房殿春;杨仕明;;动物活体光学成像的应用进展[J];实用临床医药杂志;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林金星;;光激活荧光蛋白及其在植物分子细胞生物学研究中的应用[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
2 王江云;;具有光活性蛋白质的设计[A];中国化学会第28届学术年会第11分会场摘要集[C];2012年
3 骆海明;;基于四聚体远红荧光蛋白的八价纳米探针及其肿瘤靶向性研究[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年
4 张智红;储军;秦岭松;骆清铭;;活细胞内多对蛋白质间相互作用的同步光学成像研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
5 李向勇;杨杰;张智红;;不同荧光片段BiFC效应的比较研究[A];中国遗传学会第十届全国激光生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
6 邓为;杨东山;赵本田;宋军;欧阳振;吴清洪;那顺巴雅尔;顾为望;赖良学;;表达红、黄、青、绿四色荧光蛋白的转基因克隆猪研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 刘长青;娜日苏;陆涛峰;关伟军;;六种荧光蛋白基因在蒙古羊成纤维细胞中的时空表达[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
8 赵智平;匡晔;徐赛龙;张法智;;水滑石纳微图案化薄膜固载荧光蛋白的性能研究[A];中国化学会第27届学术年会第16分会场摘要集[C];2010年
9 刘长青;刘丹;那日苏;陆涛峰;吴宏梅;关伟军;;6种荧光蛋白基因转染东北虎与孟加拉虎成纤维细胞中的动态表达及分布[A];野生动物生态与资源保护第三届全国学术研讨会论文摘要集[C];2006年
10 郝永新;李雪莲;陈丹;刘群;;弓形虫瞬时转染中不同启动子介导的双报告基因优化[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘俊;高亮荧光蛋白的光激活和光漂白特性研究[D];华中科技大学;2011年
2 梁俊毅;绿色荧光蛋白质传感器构建和变异体性质改进[D];南京大学;2012年
3 苏挺;EGF诱导的Src信号动力学的实时光学成像研究[D];华中科技大学;2012年
4 杨中琴;适用于荧光蛋白标记大样本的塑性包埋方法研究[D];华中科技大学;2013年
5 杨杰;肿瘤细胞基质金属蛋白酶活性的动态光学成像[D];华中科技大学;2006年
6 涂昀;纤维堆囊菌基因转化体系建立及埃博霉素生物发酵和纯化工艺研究[D];重庆大学;2007年
7 张阳;人血管生成抑制因子METH1重组腺病毒载体的制备及其对兔耳增生性瘢痕影响的实验研究[D];第四军医大学;2004年
8 段小军;组织工程技术修复骨缺损的相关实验研究[D];第三军医大学;2005年
9 李向勇;KRAS信号通路蛋白相互作用的双分子荧光互补成像研究及其优化[D];华中科技大学;2012年
10 叶逢春;多功能融合肝素酶的设计及其制备低分子量肝素工艺[D];清华大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙婷婷;人工合成荧光蛋白的表达、性质鉴定和亚细胞定位及其突变体的构建和性质鉴定[D];浙江理工大学;2010年
2 冯倩;荧光蛋白快速监控臭氧与混合细菌作用过程机理的研究[D];北京化工大学;2010年
3 王茗;基于荧光蛋白的蛋白酶和蛋白激酶检测新方法[D];湖南大学;2013年
4 朱青;次氯酸荧光蛋白探针[D];华东理工大学;2011年
5 房晓明;细胞内金属离子荧光蛋白探针[D];华东理工大学;2012年
6 NashaatS.Rasheed 那沙特;大斯托克斯位移黄色荧光蛋白mAmetrine的结构分析[D];华中科技大学;2011年
7 邓敏琰;铜离子荧光蛋白探针[D];华东理工大学;2011年
8 李红臣;荧光蛋白iLOV2的改造、原核表达及晶体筛选[D];吉林大学;2013年
9 王晓利;荧光蛋白标记的t-PA EGF缺失基因在鸡体内定位表达及靶向转运[D];河南科技大学;2011年
10 张茜;cAMP及Azurin荧光蛋白探针[D];华东理工大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张佳星;“火眼金睛”窥测基因调控[N];科技日报;2008年
2 记者 黄堃;断肢如何能再生?蝾螈细胞有记忆力[N];新华每日电讯;2009年
3 何德功;解开记忆之谜[N];人民日报;2004年
4 卢育辉;昔日普通唐鱼如今现红光[N];广东科技报;2007年
5 葛进;神经及肌肉细胞的兴奋状况实现可视化[N];科技日报;2008年
6 记者 汪敏华;实验室成果也可挂牌交易[N];解放日报;2000年
7 紫箕;癌症检测只需10分钟[N];医药经济报;2007年
8 李彬;世界第一只转基因猴“安迪”出世[N];科技日报;2001年
9 陈金亮 李建军;多元化阶梯式治疗肌营养不良[N];健康报;2006年
10 记者 白毅;我国发现SARS病毒借助胞膜“脂筏”进入宿主细胞[N];中国医药报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978