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Delta4、Notch2、Notch4在早产大鼠高氧肺损伤中作用机制的研究

刘春梅  
【摘要】: 第一部分Delta4、Notch2、Notch4在早期大鼠肺发育过程中的作用 目的研究Delta4及其受体Notch2、Notch4在早产大鼠肺发育过程中的表达,探讨Delta4及Notch2、Notch4在肺发育过程中的作用。 方法取孕18d、20d、21d胎鼠和孕21d早产鼠(足月为22d)生后1d、7d、14d和21d肺组织标本(n=8),HE染色进行组织形态学观察、免疫组化法和半定量RT-PCR法检测Delta4及Notch2、Notch4的表达。 结果1.孕龄18d胎肺见支气管树分支形成,间质中毛细血管毗邻气道分布;20d至早产生后1 d时,肺组织基本结构为终末囊泡,上皮分隔进一步发展,间质减少,毗邻上皮的毛细血管增多;7d、14d肺泡数目增多并渐渐成熟,气血屏障变薄;21d肺泡壁进一步变薄,间质细胞少见。2.免疫组化结果显示: Delta4在A18天表达最丰富,后表达呈下降趋势;Notch2在孕18d、20d即有表达,21d表达最强,出生后表达逐渐减弱;Notch4在孕18d表达最明显,以后呈减弱趋势。3. RT-PCR检测Notch2、Notch4 mRNA变化与多肽变化规律相似。 结论Delta4及Notch2、Notch4参与大鼠早期肺发育过程。 第二部分85﹪高氧对早产大鼠肺Delta4、Notch2、Notch4影响 目的研究高浓度氧对早产大鼠肺发育过程Notch信号配体Delta4和受体Notch2、Notch4表达的影响,探讨它们在高氧肺损伤中的作用机制。 方法受孕SD母鼠孕21d剖宫产娩出新生大鼠随即分为Ⅰ组空气组和Ⅱ组高氧组。Ⅱ组置于氧箱中,氧浓度约85﹪,温度25-26℃,湿度60-70%,二氧化碳浓度 0.5%。Ⅰ组置于同一室内常压空气中。Ⅱ组暴露于高氧中足1、7、14、21 d,分别在Ⅰ、Ⅱ组随机各取动物8只处死后取肺标本,左肺行Delta4和Notch2、Notch4免组化切片用,右肺冻存液氮做Delta4和Notch2、Notch4及β-actin的RT-PCR用。 结果1.高氧组1d时肺组织未见明显病变,7、14d时见血管减少,结构紊乱;14、21d时肺泡形成明显滞后,即典型小直径肺泡数目较对照组显著减少,肺泡结构简单化和囊泡化,断裂融合,终末气道多为较大的囊泡,血管明显减少,结构不完整,与受损肺泡无伴行关系,间质纤维增生,肺泡壁增厚。2.染色阳性信号为棕黄色颗粒,定位于胞膜。Delta4特异性表达在内皮细胞,高氧组表达增强,Delta4在1 d表达稍降低,在7、14d时间点表达增加,21d表达再次降低,在7、14d表达较对照组有显著性差异(p0.05); 3. Notch2较均匀表达在上皮、内皮和成纤维细胞,高氧组Notch2表达在各时间点呈下降趋势,在1、7、14d较对照组降低显著性差异(p0.05)Notch4特异性表达在内皮细胞,高氧组表达增强,Notch4在1 d表达稍降低,在7、14d时间点表达增加,21d表达再次降低,在7、14d表达较对照组有显著性差异(p0.05);4. Delta4和Notch2、Notch4 mRNA在高氧组的变化与多肽变化规律相似。 结论高氧导致Delta4、Notch2、Notch4表达异常,是导致未成熟肺组织发育受阻尤其是肺微脉血管发育异常的重要因素。


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