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LRIG3对胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性影响的分子生物学机制研究

席桂发  
【摘要】: 第一部分胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究 目的明确胶质母细胞瘤细胞系GL15的生物学特征并探讨EGF对GL15细胞系生物学特征的影响。 方法在连续培养的过程中,观察胶质母细胞瘤GL15细胞系的形态学表现和生长增殖特性。免疫细胞化学方法行GFAP、PCNA染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,并与U251MG和U373MG胶质母细胞瘤细胞系进行比较。 结果GL15细胞形态为典型的胶质母细胞瘤形态,镜下可见很多有丝分裂核细胞,细胞器发达,生长增殖活跃,具有克隆形成和侵袭能力。GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达。EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达。结论GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤很理想的细胞平台。该细胞系的生物学特性与EGFR紧密相关。 第二部分EGF和AG1478对GL15细胞增殖侵袭和GFAP表达的影响 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对人胶质母细胞瘤GL15细胞系细胞生物学特性的影响。 方法甲基四唑兰(MTT)和Transwell分别检测表皮生长因子(EGF), AG1478对GL15细胞增殖和侵袭力的影响,逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF和AG1478作用后GL15细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP) mRNA和蛋白表达。 结果外源性的EGF双向调节GL15细胞增生和生长,小剂量(50ng/ml,100ng/ml)EGF能促进细胞增生和提高细胞侵袭能力以及GFA/minRNA和蛋白表达,而大剂量(200ng/ml)则能降低其增殖和侵袭能力,AG1478则能明显拮抗EGFR活性。 结论GL15胶质母细胞瘤细胞系的生物学特性与EGFR所在的7号染色体过度扩增密切相关。EGF可双向调节GL15细胞系的生长,AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治疗胶质母细胞瘤的理想靶点。 第三部分LRIG3调控GL15细胞生物学活性的分子机制的研究 目的探讨LRIG3调控胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学行为的分子机制。 方法用LRIG3-EGFP质粒转染GL15细胞,流式细胞仪分析转染后细胞周期的变化,MTT法和Transwell分析检测EGF和AG1478对转染后的细胞增殖和侵袭的影响,逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF作用于转染后的GL15细胞EGFR和LRIG3蛋白表达的变化。 结果将质粒LRIG3-EGFP转染GL15细胞后,LRIG3主要在胞浆表达,转染后的细胞其细胞周期多阻滞在S期,细胞侵袭性明显下降。用100ng/mlEGF分别作用于各实验组细胞后,不同的时间点其EGFR和LRIG3表达不同,随时间延长,EGFR的表达下降,LRIG3表达增加。 结论过表达LRIG3-EGFP可以抑制胶质瘤细胞生长并使其侵袭性下降,这种抑制作用与EGFR的活性密切相关。LRIG3可能是基因治疗胶质母细胞瘤重要的靶基因。


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