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甘草系列多糖的制备及生物活性研究

胡菁  
【摘要】: 多糖作为一类重要的生物活性物质,已越来越受到人们的广泛重视。本文以甘草为原料制备了系列甘草多糖(GPS),并研究了其免疫、抗肿瘤及抗衰老生物活性,初步探讨了GPS1级分的结构。以上研究,为充分合理开发甘草资源以及甘草多糖的运用提供了实验依据。 本实验确立了甘草多糖提取分离工艺,优化了提取分离工艺参数,确定了含量分析方法。最佳提取工艺为用15倍量水溶液80℃水浴提取2次,每次提取2 h;最佳沉淀工艺为提取液浓缩至原体积的2/5后,添加4倍浓缩液体积的98%的乙醇;最佳脱蛋白方法选用三氯乙酸法沉淀2次,离心弃去沉淀;最佳脱色工艺选用0.4%的活性炭去除色素;最佳干燥方式采用低温冷冻干燥。甘草多糖含量分析方法以葡萄糖为对照品,采用硫酸苯酚法,试验结果相对标准偏差较小,重现性和稳定性好,加样回收率较高。测得甘草中多糖平均含量为1.43%。 采用阴离子交换树脂DEAE-52柱层析对甘草多糖组分进行分离,得到4种系列多糖GPS1、GPS2、GPS3和GPS4。将GPS1级分进行葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析、透析、冻干得到白色GPS1多糖纯品,测得其相对分子质量为66KDa。红外光谱分析表明,GPS1可能是一种α-D-吡喃多糖。 采用体内动物活性实验研究甘草多糖对小鼠非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫、免疫器官的影响,以及抗肿瘤、抗衰老作用。结果表明,甘草多糖能促进正常小鼠血清溶血素IgM和IgG的生成,提高抗体生成细胞水平和胸腺、脾脏指数,增强巨噬细胞的吞噬活性,提高免疫抑制小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,降低NO浓度,抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞S180的生长,提高衰老小鼠血清中SOD水平,降低MDA含量。预示着甘草多糖在增强免疫、抗肿瘤和抗衰老方面具有良好的应用前景,为临床进一步开发此类新药提供了理论基础。


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