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露蜂房蛋白[NVP(1)]抑制HepG2细胞增殖的机制研究

汪长东  
【摘要】: 胡蜂亦称黄蜂,膜翅目(Hymenoptera)胡蜂科(Vespidae)胡蜂属(Polistes),体乌黑发亮,有黄条纹和成对的斑点。胡蜂广泛分布在我国大部分山区,露蜂房为其巢,其中存在大量的抗癌活性物质。研究露蜂房蛋白质对抗癌细胞增殖的药物开发具有重要意义。但露蜂房蛋白质的种类较多,成分复杂,很难分离纯化出一个单一的蛋白质,目前国内外对其研究少有报道,本研究从露蜂房中分离出一个新的蛋白质,并深入地研究了其药理特性,完成的工作主要包括以下几个方面: 1.利用双蒸水长时间4℃浸提,硫酸铵沉淀,0.22μm的滤膜透析脱盐,Sephdex-G50凝胶过滤,反相高效液相色谱层析等方法,从露蜂房中分离纯化出一种蛋白质,质谱分析其分子量为6.6 kD,并定义它为NVP(1)。 2.研究了NVP(1)调节HepG2细胞的增殖机制。6.6μg/ml NVP(1)抑制HepG2细胞增殖作用发生在细胞周期的G1期,并且抑制cyclin B,cyclin D1和cyclin E mRNA的表达,NVP(1)也抑制了cdk2蛋白质的表达,但能增加p27,p21蛋白质的表达;此外,NVP(1)不能明显改变p16蛋白质的表达水平。通过细胞核染色质浓缩检测发现,NVP(1)可促进HepG2细胞凋亡。此外,NVP(1)激活了细胞外调节激酶(ERK)信号通路,当HepG2细胞提前用ERK的特异性抑制剂处理后,p-ERK蛋白质的表达量明显降低。这些结果表明,NVP(1)抑制HepG2细胞增殖是通过激活ERK信号通路,NVP(1)有可能成为肝癌治疗的一种潜在的药物。 3.研究rSK3,rIK通道在细胞增殖中的作用。NVP(1),能抑制Hek-293细胞增殖。Southern-blot检测转基因rSK3,rIK成功,转rSK3,rIK基因后,能消减NVP(1)抗细胞增殖的作用,rSK3,rIK促进细胞增殖。 4.研究了NVP(1)对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制。用原代细胞培养,MTT法,流式细胞和免疫印迹检测细胞增殖。发现6.4×10~(-3)g/L的NVP(1)可明显抑制支气管平滑肌细胞增殖,并且阻断在细胞周期的G_1期,对照组G_1期为64.6%,而NVP(1)处理组为90.5%。NVP(1)能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂(p21)蛋白质的表达,降低细胞周期蛋白激酶(cdk2)蛋白质的表达。NVP(1)阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G_1期。


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1 汪长东;露蜂房蛋白[NVP(1)]抑制HepG2细胞增殖的机制研究[D];华中科技大学;2008年
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