收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于mCherry的双分子荧光互补系统研究

樊晋宇  
【摘要】: 检测细胞内蛋白质之间的相互作用对于理解生命的活动过程有重要的意义。目前已经有许多技术被开发并用于体内蛋白质相互作用的检测,如酵母双杂交技术,荧光共振能量转移技术及蛋白质片段互补技术等,但是这些技术各有优缺点。 近年来发展的双分子荧光互补技术(BiFC)正在被广泛应用于体内蛋白质相互作用研究。该技术基于如下原理:荧光蛋白被切成两个肽段后,每个肽段不能被激发发射荧光,也不能自发组装成完整的荧光蛋白从而被激发产生荧光,但是当两个片段分别融合于相互作用的两个蛋白时,在相互作用蛋白的辅助下能重新组建成完整的荧光蛋白,从而被激发产生荧光。BiFC技术具有简单,快速,直观,灵敏及定位等特点,然而迄今存在的BiFC系统的特征光谱较短(≤570 nm),本研究将波长较长(587/610 nm)的第二代红色单体荧光蛋白mCherry发展成一个新的BiFC系统,扩展了BiFC技术的波谱范围。 根据mCherry的晶体结构,将mCherry分别从3个氨基酸位点(136/137,159/160,174/175)切开,用EGFP作为弱相互作用蛋白筛选出从位点159/160切开所形成的两个片段能够产生BiFC信号,发展了基于mCherry的BiFC系统。用已知相互作用的一组蛋白(SV40的大T抗原(LTag)和人源p53)作为研究对象,验证了mCherry-BiFC系统在细胞内研究蛋白质相互作用的可靠性。 本研究亦引入Venus-BiFC系统,将mCherry-BiFC和Venus-BiFC在细胞内共用同时检测两组蛋白质的相互作用(LTag和p53及早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和sp100),结果表明mCherry-BiFC系统和其他BiFC系统可以共用,能够用于检测多个蛋白之间的相互作用。由于mCherry较强的亮度,较短的成熟时间(T1/2≈25 min),较长的激发和发射波长,使得本研究所发展的mCherry-BiFC系统成为一个很好的体内蛋白质相互作用研究工具,并能和其他BiFC系统共用,同时研究体内多个蛋白间的相互作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨坤宇,刘如石,林鉴,张智洪,张军,夏宁邵;红色荧光蛋白在毕赤酵母中的高效表达[J];厦门大学学报(自然科学版);2005年03期
2 邹海波,安洪,蒋电明,刘建伟,周亚莉;红色荧光-VEGF_(165)融合蛋白载体在细胞内的定位和表达[J];创伤外科杂志;2004年03期
3 王丹艺,倪培华,宋巍,应雅韵,周同;P-选择素凝集素样结构域和红色荧光蛋白融合基因的构建[J];临床检验杂志;2002年04期
4 李文林,苏娟,陶欣荣,Joseph T Lau,胡以平;表达红色荧光蛋白DsRed报告基因的逆转录病毒载体的构建和在肝干细胞体内示踪中的应用[J];第二军医大学学报;2005年03期
5 郝丽梅;李唐棣;梅兴国;;红色荧光蛋白的研究进展[J];国外医学(药学分册);2006年02期
6 樊晋宇;崔宗强;张先恩;;红色荧光蛋白的光谱多样性及体外分子进化[J];生物化学与生物物理进展;2008年10期
7 严晶;霍克克;;双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用[J];生物化学与生物物理进展;2006年06期
8 贾俊双;肖高芳;林晓琳;张晟;姚志芳;杜文婷;申红芬;刘科;饶子亮;孙妍;姚开泰;肖东;;慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠[J];中国比较医学杂志;2010年02期
9 李丽娜;张延平;孙玉蕊;张宗林;王戈;张晓强;冯冲;潘登科;;人GJB6基因表达载体的构建及鉴定[J];中华耳科学杂志;2010年04期
10 郝好杰,凌贤龙,徐元基,杜芝燕,王妍,陈惠华,陆应麟;带红色荧光蛋白靶向线粒体载体的构建与表达[J];生物技术通讯;2005年04期
11 徐洪;胡亮;倪培华;吴洁敏;赵涵芳;;人regucalcin和红色荧光蛋白融合基因的构建及表达[J];诊断学理论与实践;2006年03期
12 刘刚;李云;张燕;;红色荧光蛋白在丝状真菌里氏木霉中的表达[J];生物技术;2006年06期
13 张美蓉;陈玉琳;徐汉福;刘春;赵萍;夏庆友;;红色荧光标记载体pBacA4DsRed的构建及其在蚕卵中的瞬时表达[J];农业生物技术学报;2007年02期
14 郭超;Alexander Endler;张敬;石红军;张军;;含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建[J];同济大学学报(医学版);2008年01期
15 陈菁;;双分子荧光互补技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用进展[J];生物医学工程研究;2008年04期
16 单永立;李艳;朱学良;;绿色荧光蛋白——照亮生命科学的一盏明灯[J];生命科学;2008年06期
17 王丹;梅柱中;刘爱华;明小燕;王达安;王旭;姜勇;;Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达[J];热带医学杂志;2010年02期
18 李小颖;苏卫;张连峰;;SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较[J];中国比较医学杂志;2010年03期
19 卢建溪;阳莉;钱师宇;王强;;携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建[J];中国微生态学杂志;2011年08期
20 刘娜,万瑛,周镜然,邹丽云,支轶,郭晟,吴玉章;红色荧光蛋白与卵白蛋白表位融合蛋白的表达与纯化[J];免疫学杂志;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 龙华;尾里;建二郎;若松佑子;松岛良次;;红色荧光蛋白(RFP)基因在转基因青鳉中的表达[A];中国青年农业科学学术年报[C];2002年
2 刘红波;杨小淦;吕培茹;左二伟;王献伟;胡林林;宁淑芳;陆阳清;卢晟盛;卢克焕;;转红色荧光蛋白基因细胞非侵入式人工智能检测与预测体系的建立[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
3 康锦丹;金永勋;赵明辉;高威威;梁爽;刘希;尹熙俊;;利用体细胞核移植技术生产表达红色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
4 刘红波;吕培茹;王献伟;杨小淦;胡林林;宁淑芳;陆阳清;卢晟盛;卢克焕;;广西巴马小型猪转红色荧光蛋白克隆胚胎体内外发育潜能测定[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
5 简清;白俊杰;叶星;夏仕玲;劳海华;罗建仁;;转红色荧光蛋白基因斑马鱼的构建[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
6 杨英;杨军;;HGF红色荧光蛋白融合载体的构建及表达[A];天津市生物医学工程学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年
7 徐仰龙;杨德琴;;变异链球菌管家基因荧光蛋白表达载体的构建[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
8 郭超;Alexander Endler;张敬;石红军;张军;;含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
9 李小颖;苏卫;张连峰;;SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年
10 贺伟峰;袁顺宗;彭旭;谭江琳;马兵;易绍萱;陈希炜;黄正根;程文广;贾雄飞;王晓娟;甘成军;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;人P311红色荧光蛋白重组载体的构建、表达与细胞内定位研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 樊晋宇;基于mCherry的双分子荧光互补系统研究[D];华中科技大学;2008年
2 魏映辉;双色荧光RNAi技术平台的建立和抗SARS-CoV RNAi的研究[D];吉林大学;2005年
3 徐海荣;高通量筛选肿瘤预防药物技术平台的建立及中医药应用研究[D];扬州大学;2010年
4 邹海波;pDsVEGF_(165)Red1-N1、pIRES2-BMP_2-EGFP表达质粒的构建及其促进兔大段骨缺损修复作用的初步研究[D];重庆医科大学;2004年
5 刘仕勇;BMP4对SVZa神经干细胞增殖和分化的调控[D];第三军医大学;2005年
6 李明乾;家蚕传染性软化病病毒翻译起始机制的研究[D];浙江大学;2012年
7 陈坚;携带鼠白介素12基因的可调控腺病毒治疗胃癌的实验研究[D];第二军医大学;2007年
8 冯娟;扩张型心肌病转基因小鼠模型的建立和心肌病修饰基因的筛选[D];中国协和医科大学;2008年
9 石建军;基因改造兔技术平台的建设[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
10 郭旭东;绒山羊转胰岛素样生长因子Ⅰ基因体细胞核移植胚胎的制备[D];内蒙古大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵坤;利用红色荧光蛋白构建直观判断重组子的大肠杆菌表达载体[D];北京化工大学;2012年
2 朱颜婷;应用红色荧光蛋白建立外源基因水稻胚乳特异删除系统的初步研究[D];福建农林大学;2010年
3 龚小卫;p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体的构建及表达[D];第一军医大学;2001年
4 徐金国;胆色素红色荧光蛋白的分子定向进化[D];华中农业大学;2012年
5 顾蕊;兔骨髓间充质干细胞在活体兔椎间盘内存活状态观察[D];青岛大学;2009年
6 付奎;活体荧光成像评估Ag85A和Ag85B DNA疫苗对小鼠膀胱癌移植瘤的疗效[D];山西医科大学;2010年
7 贾艳华;红色荧光蛋白基因标记荧光假单胞菌的研究[D];河北农业大学;2005年
8 蓝丹锋;GAP-43和红色荧光蛋白融合基因重组腺相关病毒载体的构建及表达[D];福建医科大学;2006年
9 刘振青;3-β-Δ24-脱氢胆固醇还原酶的拓扑空间结构研究[D];辽宁大学;2011年
10 贾俊双;慢病毒载体法制备双报告基因Fluc-mRFP转基因小鼠[D];南方医科大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978