收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人TFPI基因转移对搭桥模型移植静脉血栓形成和内膜增生的影响

厉泉  
【摘要】: 实验一真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI的构建及鉴定 目的构建并鉴定真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI,为下一步转染静脉血管内皮细胞抗再狭窄研究奠定基础。方法用RT-PCR的方法提取全长人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因,引入Kozak序列和亚克隆位点,将(Kozak)TFPI序列连入T载体中测序。然后将(Kozak)TFPI序列亚克隆入pCMV质粒中,酶切鉴定。结果测序获得的全长人TFPI基因序列与GeneBank中该序列完全一致,Kozak序列成功加入。酶切鉴定(Kozak)TFPI序列成功克隆入pCMV中。结论成功构建了pCMV-(Kozak)TFPI真核表达载体。 实验二外源TFPI基因mRNA和蛋白在人脐静脉内皮细胞中表达的检测 目的检测真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达效果,以评价该载体的表达能力。方法将长有HUVEC的4个6孔培养板中24孔平均分为2组,即TFPI转染组和空载体转染组,每组12孔。TFPI转染组在阳离子脂质体介导下,用pCMV-(Kozak)TFPI转染HUVEC,而空载体转染组则以空载体pCMV代替pCMV-(Kozak)TFPI转染HUVEC,其余条件均相同。转染24h后,以RT-PCR、免疫荧光和Western blot法检测HUVEC中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达,并根据免疫荧光结果计算外源TFPI基因的转染率。结果RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测到TFPI转染组中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。外源TFPI基因的转染率为23%。结论真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI在转染的HUVEC中成功的表达出了外源TFPI mRNA和蛋白。 实验三人TFPI基因转染对兔移植静脉血栓形成和近期通畅率的影响 目的为减少冠状动脉旁路移植术后血栓形成,探讨人TFPI基因转染对兔移植静脉血栓生成的影响。方法将60只日本大耳白兔随机分为3组,每组20只,即TFPI转染组、空载体对照组和空白对照组。建立颈总动脉旁路移植模型,吻合前,TFPI转染组采用阳离子脂质体pCMV-(Kozak)TFPI(400μg)和腔内加压灌注法(30min)转染移植静脉内皮细胞,空载体对照组以空质粒pCMV(400μg)代替pCMV-(Kozak)TFPI,而空白对照组静脉内皮不予干预。术后3d,用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学法检测外源基因在移植静脉中的表达,病理标本、扫描电镜观察移植静脉血栓形成情况。术后30d,血管多普勒观测其通畅率。结果术后3d,TFPI转染组移植静脉中有人TFPI基因mRNA和蛋白表达。TFPI转染组、空载体和空白对照组分别有1条、8条和7条移植静脉发生血栓;术后30d,以上各组分别有0条、5条和5条移植静脉完全闭塞,前者静脉血栓发生率低于后两者(P0.05),而静脉通畅率高于后两者(P0.05)。术后3d,扫描电镜显示两对照组内皮表面有红细胞和血小板黏附、聚集,而TFPI转染组基本正常。结论人TFPI基因干预,减少了兔移植静脉血栓形成,提高了近期通畅率。 实验四人TFPI基因转染对兔移植静脉新生内膜的影响 目的为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨人TFPI基因转染对兔移植静脉内膜增生的影响。方法将60只日本大耳白兔随机分为3组,每组20只,即TFPI转染组、空载体对照组和空白对照组。建立颈总动脉旁路移植模型,吻合前,TFPI转染组采用阳离子脂质体pCMV-(Kozak)TFPI(400μg)和腔内加压灌注法(30min)转染移植静脉内皮细胞,空载体对照组以空质粒pCMV(400μg)代替pCMV-(Kozak)TFPI,而空白对照组静脉内皮不予干预。术后3d,用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学法检测外源基因在移植静脉中的表达。术后30d,血管多普勒测量移植静脉管腔内径和管壁厚度。组织病理标本测量内膜面积(I)和中膜面积(M)并计算(I/M)。透射电镜观察移植静脉新生内膜的细胞构成。结果术后3d,TFPI转染组移植静脉中有人TFPI基因mRNA和蛋白表达。术后30d,TFPI转染组移植静脉管腔内径为(2.68±0.32)mm,大于空载体对照组(2.41±0.23)mm和空白对照组(2.38±0.21)mm(P0.05)。TFPI转染组管壁厚度为(1.09±0.11)mm,小于空载体对照组(1.28±0.16)mm和空白对照组(1.34±0.14)mm(P0.01)。TFPI转染组移植静脉I和I/M分别为(0.62±0.05)mm2及0.51±0.08,均小于两对照组(0.70±0.05)mm2、(0.72±0.04)mm2(P0.05)和0.58±0.06、0.59±0.08(P0.05);M各组差异无统计学意义(1.23±0.11)mm2、(1.22±0.11)mm2和(1.23±0.12)mm2(P0.05)。透射电镜观察,TFPI转染组静脉内膜多个视野下未发现平滑肌细胞,而其余两组多个视野下发现平滑肌细胞。结论人TFPI基因转染减轻了兔移植静脉内膜增生。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 董振元;;CO中毒致双下肢动静脉血栓形成治愈1例[J];辽宁医学杂志;1991年01期
2 杨小琴;静脉置管封管后血栓形成的原因和预防[J];护士进修杂志;1992年11期
3 贺新生;产后上矢状窦静脉血栓形成5例临床分析[J];实用心脑肺血管病杂志;1996年04期
4 ;胰腺[J];国外科技资料目录(医药卫生);1998年11期
5 苑超;静脉血栓形成(VT)病因学进展[J];当代医学;2003年07期
6 边玉兰;肱骨骨折合并肱动脉损伤的护理[J];现代医药卫生;2005年17期
7 冯慧斌;;急诊下肢深静脉血栓形成的治疗分析[J];岭南急诊医学杂志;2005年04期
8 姜飚;周生慧;贾振忠;;肌袢成形术和大隐静脉转流术治疗下肢深静脉血栓形成后遗症的效果比较[J];山东医药;2006年09期
9 王辰;翟振国;;肺血栓栓塞症-深静脉血栓形成的预防策略[J];实用心脑肺血管病杂志;2006年01期
10 冉丹;孙汉英;黄争艳;刘文励;;静脉血栓性疾病112例临床分析[J];中国血液流变学杂志;2006年01期
11 沈庆明;朱仕钦;;最大静脉回流量测定在下肢深静脉血栓形成诊断中的价值[J];中华普通外科杂志;2006年02期
12 蔡雪梅;郭英;刘天凤;杨炳益;;肺栓塞与实验室检查探讨[J];检验医学与临床;2008年02期
13 高宝玲;巩志松;高燕;;静脉麻醉无痛人流术后静脉血栓形成8例临床分析[J];中国煤炭工业医学杂志;2008年03期
14 魏崴;吴杰;;老年患者急性下肢深静脉血栓形成的早期诊断与治疗[J];吉林医学;2008年23期
15 邹晓鸿;颜骅;钱伟峰;;以下肢深静脉血栓形成为首发症状的产后系统性红斑狼疮一例[J];中国全科医学;2009年06期
16 王梦华;王子宣;王文波;;肠系膜静脉血栓形成八例诊治分析[J];中国全科医学;2009年08期
17 于春生;周瑾;;老年患者腹腔镜术后静脉血栓形成临床分析[J];中国临床研究;2010年04期
18 李俊刚;蔡俊刚;霍伟英;;中西医结合治疗下肢深静脉血栓形成61例疗效观察[J];河北中医;2010年06期
19 张羡;;深静脉血栓形成后遗症辨证施护[J];河北中医;2010年06期
20 蒋立新;;尿激酶联合丹红注射液治疗下肢深静脉血栓形成疗效观察[J];山东医药;2010年49期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李俊海;张秀军;黄梅;曹健鹏;刘存发;王欣;张楠;戴兵;;内脏静脉血栓形成诊治分析[A];2010年中国中西医结合周围血管疾病学术交流会论文集[C];2010年
2 沙一岭;;中西医结合治疗静脉血栓形成69例疗效观察[A];全国中西医结合周围血管疾病学术研讨会论文选编[C];2001年
3 陈建华;徐健;马文锋;张健;段志泉;辛世杰;;上肢深静脉血栓形成的诊治分析[A];贵州省医学会胸心血管外科分会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 钟武;何延政;先德海;杨辉;曾宏;施森;;下腔静脉滤器植入与下肢深静脉取栓术[A];第二届全国解剖学技术学术会议论文集[C];2009年
5 李鸣;金炜;张鸿坤;潘松龄;汪忠镐;;抗心磷脂抗体与手术后深静脉血栓形成[A];浙江省中西医结合学会周围血管疾病专业委员会第一次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年
6 刘日光;尹培荣;陈华燕;刘建湘;;人工关节置换术后肺栓塞临床分析[A];2007年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2007年
7 黄景勇;虞冠锋;倪海真;吴子衡;焦元勇;郑祥韬;;下肢静脉曲张术后并发症状性深静脉血栓形成17例分析[A];2008年浙江省血管外科年会论文汇编[C];2008年
8 何菊;李俊海;黄梅;曹健鹏;;抗凝等方法治疗下肢骨折术后下肢深静脉血栓形成早期疗效分析[A];中国中西医结合学会周围血管疾病专业委员会周围血管疾病学术会议论文集[C];2007年
9 王鹏;张皓;张柏根;;“通脉化栓胶囊”对兔静脉血栓形成治疗效用[A];全国中西医结合周围血管疾病学术研讨会论文选编[C];2001年
10 张丽;章小飞;;血管介入联合取栓术治疗急性下肢深静脉血栓的护理体会[A];2008年浙江省血管外科年会论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 周玉斌;国人DVT与MTHFR基因多态的相关性及介入性防治方法的应用与研究[D];中国医科大学;2003年
2 邓明扬;血栓性血小板减少性紫癜临床与实验室特点分析及动静脉血栓形成获得性/遗传性危险因素筛查[D];中南大学;2010年
3 鲁祥石;康脉Ⅱ号胶囊口服和篷子菜浸出液湿敷治疗肿瘤术后化疗置管所致输液性静脉炎的临床和实验研究[D];黑龙江中医药大学;2013年
4 周为民;深静脉血栓形成病因学及基因治疗的初步研究[D];苏州大学;2010年
5 唐亮;中国人群易栓症的分子遗传学研究[D];华中科技大学;2013年
6 唐亮;中国人群易栓症的分子遗传学研究[D];华中科技大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陆路;静脉血栓形成复发因素的meta分析[D];新疆医科大学;2013年
2 郑魁;丹参多酚酸盐预防妇科手术后静脉血栓形成的临床研究[D];新疆医科大学;2013年
3 马国峰;静脉血栓栓塞症中癌症与非癌症患者临床特征的比较分析[D];浙江大学;2007年
4 陈晶;腹腔镜胆囊切除术中气腹压对下肢静脉压的影响[D];新疆医科大学;2007年
5 余海林;兔颈静脉血栓形成对颅内循环系统的影响[D];福建医科大学;2011年
6 叶贵聪;脉络宁预防人工髋关节置换术后下肢深静脉血栓形成的作用[D];广州中医药大学;2008年
7 承彬;养阴活血方预防人工髋膝关节置换术后下肢深静脉血栓发生的临床研究[D];南京中医药大学;2007年
8 石士奎;肺栓塞和下肢静脉血栓形成的多层螺旋CT血管成像研究[D];郑州大学;2006年
9 王驰仲;急性脑卒中住院患者静脉血栓栓塞性事件研究[D];上海交通大学;2008年
10 韩宗霖;腘静脉置管溶栓联合手术及腔内治疗下肢深静脉血栓临床研究[D];山东大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 知陶;疗效相当 成本减六成[N];医药经济报;2003年
2 知陶;术后VTE可防[N];医药经济报;2002年
3 董 丽;警惕血管中游荡的“黑客”[N];中国中医药报;2005年
4 本报记者 赵俊梅;真的是民警打死人吗[N];人民法院报;2003年
5 副教授 李友元;长期卧床害处多[N];大众卫生报;2000年
6 湘雅二医院 李友元;长期卧床的八大危害[N];大众卫生报;2002年
7 罗学宏;下肢增粗小心肺癌[N];大众卫生报;2003年
8 ;维生素C可大量服用吗[N];安徽经济报;2001年
9 陶春祥;低分子质量肝素的应用[N];中国医药报;2000年
10 ;肝素在内科中的应用与禁忌[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978