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同型半胱氨酸致多巴胺能神经元模型内质网应激的研究

王振炎  
【摘要】: 第一部分内质网应激途径介导Hcy致多巴胺能神经元凋亡 目的:研究同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)能否通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress ,ERS)的途径诱导体外多巴胺能神经元模型凋亡。 方法:不同终浓度的同型半胱氨酸(0、0.1、0.5,1.0、5.0和10 mmol/L)作用于经神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导的PC12细胞24h,并选5mmol/L终浓度的同型半胱氨酸在不同时间点( 0h、6h、12h、24h和48h)作用于PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞仪(Flow Cytometer)检测细胞凋亡率;半定量RT-PCR分析Caspase-12mRNA的表达。结果:PC12细胞经过Hcy处理后发生凋亡。在0~24h期间,24h凋亡率呈浓度依赖性增高。经5mmol/L同型半胱氨酸处理的PC12细胞,活力呈时间依赖性下降。随PC12细胞凋亡率增高及活力的下降,Caspase-12表达同步增加。 结论:同型半胱氨酸可以通过内质网凋亡信号途径诱导体外多巴胺能神经元凋亡。 第二部分同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的分子机制研究 目的:研究内质网应激相关凋亡通路IRE-1/TRAF-2信号转导途径在Hcy诱导PC12细胞凋亡中的作用。 方法:不同终浓度的同型半胱氨酸(0、0.1、0.5,1.0、5.0和10 mmol/L)作用于经神经生长因子诱导的PC12细胞24h,选5mmol/L终浓度的同型半胱氨酸在不同时间点(0h、6h、12h、24h和48h)作用于PC12细胞,半定量RT-PCR方法观测IRE-1和TRAF-2表达的变化,并分析其与细胞凋亡的关系。 结果:PC12细胞经过Hcy处理后发生凋亡,随细胞凋亡率的增高IRE-1和TRAF-2的表达亦相应增加。 结论:同型半胱氨酸诱导体外多巴胺能神经元凋亡与IRE-1/TRAF-2信号转导通路有关。


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