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盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发

鞠慧丽  
【摘要】: 盐酸克伦特罗(CL)是β-兴奋剂的一种,具有促进动物生长,提高饲料利用率,改善瘦肉率的作用。但该药排泄速率慢,易蓄积在动物组织中,引起消费者发生急性中毒,目前已被大多数国家列为违禁药,然而,CL滥用和残留的问题仍然存在,灵敏、有效的残留检测方法是控制残留的基本手段。 目前国际上多使用ELISA方法作为CL快速检测的筛选方法,国内检测机构一般采用进口试剂盒进行检测,成本高,到货周期长,售后没有保证,但是在这一领域的国产试剂盒产品又存在着稳定性差,假阴性、假阳性率高等缺点,从而使国产试剂盒在这方面迟迟未打开市场。本实验着力于研制出稳定性好,假阴/阳性率低,能够与国外产品相媲美的CL快速检测试剂盒。 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,通过优化条件得到最终反应条件为:包被抗原约0.2μg/mL,抗体工作浓度约为0.059μg/mL,总体反应时间为90min,酶标二抗的稀释倍数为1:1000。建立的标准曲线的线性范围为0-8ng/mL,IC50平均为1.0ng/mL,最低检测限(LOD)达0.1ng/mL,标准点批内变异系数为1.28-13.19%,批间变异系数在5-15%之间,试剂盒保存期在1年以上。与荷兰(ED)试剂盒比对实验表明,本试剂盒的回收率在80%-120%之间,高于ED试剂盒的50%-80%的样品回收率,同时本试剂盒可以保持稳定1年以上,这与ED试剂盒相当,领先于国内试剂盒。总之,在标准点符合程度、曲线参数、实际样品回收率等方面与ED试剂盒的测量结果相当,部分指标甚至优于ED试剂盒,从而证明了本试剂盒的可用性和替代国外试剂盒的可能性。


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