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胰岛素样生长因子Ⅱ及基质金属蛋白酶9在子痫前期中的表达及其相互关系的研究

沈婷  
【摘要】: 第一部分子痫前期患者胎盘及血清中IGF-Ⅱ及MMP-9表达变化的研究 目的通过测定子痫前期(pre-eclampsia,PE)孕妇胎盘组织及血清中胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin like growth factorⅡ,IGF-Ⅱ)及基质金属蛋白酶9(matrix metallop-roteinase 9,MMP-9)的表达,探讨IGF-Ⅱ及MMP-9与子痫前期发病的关系。 方法以30例子痫前期孕妇为子痫前期组(其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期10例),15例同期分娩的正常孕妇为对照组。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组胎盘组织中IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA的表达并进行半定量分析;Westernblot法检测各组胎盘组织中IGF-Ⅱ及MMP-9蛋白质的表达并进行半定量分析;通过免疫组化染色方法检测IGF-Ⅱ及MMP-9在各组胎盘组织中的的表达部位和表达水平,通过高清晰度彩色医学图文分析系统对其进行半定量分析;ELISA法检测各组血清中IGF-Ⅱ及MMP-9的浓度。 结果①RT-PCR结果显示两组胎盘组织中均有IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA的表达,子痫前期组IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。②Western blot结果显示两组胎盘组织中均有6.7kDa的IGF-Ⅱ蛋白质表达,但子痫前期组表达量明显降低(P<0.05),同时也有92kDa的MMP-9蛋白质表达,子痫前期组表达量明显低于对照组(P<0.05)。③免疫组化染色定量分析发现,IGF-Ⅱ及MMP-9在子痫前期组胎盘组织中的表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05)。④ELISA结果显示子痫前期组血清中IGF-Ⅱ及MMP-9水平均明显低于对照组(P<0.05,P<0.05)。 结论子痫前期患者胎盘及血清中IGF-Ⅱ及MMP-9表达均明显降低,且随病情加重递减,相应部位IGF-Ⅱ和MMP-9水平呈正相关,提示IGF-Ⅱ与MMP-9与子痫前期发病密切相关。 第二部分IGF-Ⅱ及MMP-9在子痫前期患者胎盘滋养细胞内的表达及其相互关系的研究 目的通过测定正常孕妇及子痫前期孕妇胎盘滋养细胞中IGF-Ⅱ和MMP-9的表达及在IGF-Ⅱ不同作用浓度和作用时间作用下MMP-9水平的变化,从细胞水平探讨IGF-Ⅱ及MMP-9在子痫前期中的表达及IGF-Ⅱ对MMP-9表达的影响。 方法原代培养30例子痫前期孕妇胎盘滋养细胞作为子痫前期组(其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期10例)及15例同期分娩的正常孕妇胎盘滋养细胞为对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测各组IGF-Ⅱ及MMP-9的表达水平并检查在IGF-Ⅱ不同的作用时间及不同的作用浓度下各组胎盘滋养细胞MMP-9的表达水平。 结果①子痫前期组患者胎盘滋养细胞中IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA水平明显低于对照组,二者呈正相关(r=0.467,P<0.05,P<0.05)。②子痫前期组患者胎盘滋养细胞中IGF-Ⅱ及MMP-9蛋白水平明显低于对照组,二者呈正相关(r=0.577,P<0.05,P<0.05)。③加入IGF-Ⅱ作用胎盘滋养细胞后,各组MMP-9表达均上升,子痫前期组上升更明显,且呈时间和剂量依赖关系。 结论子痫前期患者胎盘滋养细胞中IGF-Ⅱ及MMP-9表达均低于正常孕妇,IGF-Ⅱ可上调MMP-9在滋养细胞中的表达,提示IGF-Ⅱ与MMP-9均参与了子痫前期的病理过程,子痫前期时IGF-Ⅱ含量减少下调MMP-9的表达可能是子痫前期发病的重要因素。 第三部分子痫前期患者胰岛素样生长因子结合蛋白-1的表达及其对IGF-Ⅱ和MMP-9表达的影响 目的检测子痫前期患者胎盘滋养细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)的表达及其对IGF-Ⅱ及MMP-9表达的影响。 方法原代培养30例子痫前期孕妇胎盘滋养细胞作为子痫前期组(其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期10例)及15例同期分娩的正常孕妇胎盘滋养细胞为对照组,采用RT-PCR法检测各组IGFBP-1的表达水平并检测在IGFBP-1不同的作用时间及不同的作用浓度下各组胎盘滋养细胞IGF-Ⅱ及MMP-9的表达水平。 结果①子痫前期组患者胎盘滋养细胞中IGFBP-1 mRNA水平明显高于对照组(P<0.05)。②加入IGFBP-1作用胎盘滋养细胞后,各组IGF-Ⅱ及MMP-9表达均下降,子痫前期组下降更明显,且呈时间和剂量依赖关系。 结论IGFBP-1可抑制IGF-Ⅱ及MMP-9在人胎盘滋养细胞中的表达,提示IGFBP-1下调IGF-Ⅱ可能参与了子痫前期的病理过程。用IGF-Ⅱ增强MMP-9基因的表达将是预防和治疗子痫前期的一个新思路。


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