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组织型转谷氨酰胺酶在后囊膜混浊中的作用研究

邢星  
【摘要】: 第一部分tTG抑制剂对人晶状体上皮细胞表达FN、Col-Ⅳ的影响研究 目的观察组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase, tTG)抑制剂单丹磺酰尸胺monodansyl-cadaverine (MDC)对转化生长因子β2 (transforming growth factor-β2, TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cells, HLECs)表达纤维连接蛋白(Fibrone-ctin, FN)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ, Col-Ⅳ)的影响。 方法将体外培养的人晶状体上皮细胞株HLE-B3分为5组:无血清培养基中培养的HLE-B3为正常对照组;加入10μg/L TGF-β2处理36h的HLE-B3为TGF-p2组;10μg/LTGF-p2与100、200和400μmol/L MDC共同处理36h的HLE-B3为不同浓度MDC组。用半定量RT-PCR检测tTG、FN、Col-Ⅳ在HLE-B3细胞中表达的变化。 结果正常体外培养的HLE-B3细胞中可表达一定量的tTG, FN及Col-Ⅳ。与正常对照组相比,TGF-β2组中tTG, FN和Col-Ⅳ的表达明显增强,差异有统计学意义(P0.01)。与TGF-β2组相比,100、200和400μmol/L MDC组中FN和Col-Ⅳ的表达含量明显减少(P0.01)。100、200和400μmol/L MDC组各组间FN和Col-Ⅳ的表达差异亦具有显著性意义(P0.01)。 结论MDC可剂量依赖性的抑制TGF-p2诱导的LECs中FN和Col-Ⅳ表达的增加。tTG可能通过促进HLECs表达FN和Col-Ⅳ等细胞外基质成分参与白内障术后后囊膜混浊(posterior capsule opacification, PCO)的形成。 第二部分RNA干扰对人晶状体上皮细胞tTG表达的影响研究 目的研究RNA干扰抑制组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase, tTG)对人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cells, HLECs)中tTG表达的影响。 方法设计并合成特异性针对tTG的3对小干扰RNA(short interfering RNA, siRNA): siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3,用Real-time RT-PCR和Western blot法检测转染了siRNA后人晶状体上皮细胞株(HLE-B3)中tTG基因在mRNA水平和蛋白水平的变化。 结果转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-348h后,tTG mRNA的表达分别下降为空白对照组的46.60%,12.84%,66.75%,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-360h后,tTG蛋白的表达含量分别下降为空白对照组的60.49%,27.87%,55.91%(P0.01)。Real-time RT-PCR与Western blot检测结果一致显示了siRNA-2对tTG基因的抑制效果最佳。 结论我们设计并合成的靶向tTG的siRNA可以显著降低tTG的表达。 第三部分tTG-siRNA对人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质沉积的作用研究 目的探讨RNA干扰抑制组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase, tTG)的表达对人转化生长因子β2(transforming growth factorβ2, TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cells, HLECs)转分化和细胞外基质沉积的抑制作用。 方法将体外培养的人晶状体上皮细胞株HLE-B3分为正常对照组,TGF-β2组和TGF-β2+siRNA组。Western blot法检测各组细胞tTG、α平滑肌肌动蛋白(a-Smooth muscle actin, a-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)和Ⅳ型胶原(collagen IV, Col-IV)的表达。 结果与正常对照组相比,TGF-β2组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显增加(P0.01);与TGF-β2组相比,TGF-β2+siRNA组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显减少(P0.01)。 结论靶向tTG的siRNA可以明显抑制TGF-β2诱导的HLE-B3细胞合成a-SMA、FN、Col-Ⅳ。提示tTG是介导TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质沉积的重要分子,tTG蛋白有望成为预防和治疗后囊膜混浊(posterior capsule opacification, PCO)的新靶点。


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