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小鼠耳显微手术器械系统及耳蜗内电位测量系统的建立和应用

周良强  
【摘要】: 目的: 开发一系列适合小鼠显微手术的专用器械和装置,建立一稳定而安全的小鼠耳蜗内电位(endocohlear potential, EP)测量系统,并介绍其在听力研究中的应用价值。 方法: 通过自行研发,我们制作了一适合小鼠显微手术的手术器械系统,包括:磁力底座拉钩、磁力底座头颅固定装置、磁力尾固定装置、可旋转电热恒温手术台、体视显微镜强光源适配器、手术器械阵列架。运用磁力底座拉钩,采用腹侧进路进行小鼠侧颅底听泡暴露及耳蜗内电位测量,并与传统方法进行比较。 结果: 磁力底座拉钩可方便并有效牵引手术切口及肌肉等软组织,牵引方向、高度及强度均可调节,可获得良好的术窗暴露效果;与常规拉钩相比,可明显缩短手术切口,对肌肉及血管损伤少,减少意外出血机会。磁力底座头颅固定装置与磁力底座尾固定装置相结合,可有效制动小鼠头颅和躯体,使耳蜗内电位记录可长期稳定的记录。可旋转电热恒温手术台可有效为磁力底座拉钩等提供磁力吸附平台,并有效维持麻醉中的小鼠体温正常,和随意改变小鼠体位,同时具有电场屏蔽功能,减少电热恒温垫的电场对耳蜗内电位记录的干扰。体视显微镜强光源适配器,可使普通无平行光源体视显微镜具有平行光源,为小鼠听泡暴露提供充分的光照。手术器械阵列架可使多种手术器械整齐有序放置,减少器械取放时间,缩短手术时间及麻醉时间。磁力底座拉钩辅助下的小鼠听泡腹侧暴露手术及耳蜗内电位测量方法,手术切口小,术中出血少,手术时间短,并可保留听骨链及鼓膜完整,术后小鼠恢复好。 结论: 磁力底座拉钩可方便有效地暴露小鼠显微手术窗口,具有微创特点,可作为一种简单有效且易于推广的小鼠术窗暴露器械。小鼠显微手术器械系统能满足长时间、精细而复杂的小鼠显微手术。腹侧进路侧颅底听泡暴露术式及耳蜗内电位测量方法,可有效减少出血,并保留小鼠鼓膜和听骨链完整,其测量方法安全又稳定。 目的: 介绍连续变倍体视显微镜(zoom-stereo microscope, ZSM)的一种特殊的暗视野照明方法在内耳显微解剖中的应用。 方法: 在小鼠耳蜗解剖中,采用纤维导光束(也称万向冷光源)从玻璃平皿侧面照射(侧射式),使光线从侧面进入,经标本反射后进入连续变倍体视显微镜光学系统而成像;并与常规的两种照明方法(落射式和透射式)的效果进行比较,并研制了一简易LED灯侧射装置。 结果: 侧射式照明效果明显比落射式和透射式好,其背景光线的干扰显著降低,达到暗视野成像效果。与落射式和透射式比较,侧射式照明可以区分耳蜗内的细微结构。 结论: 采用侧射式照明,可以提高内耳显微解剖技术的水平。 目的: 建立年龄相关性听力损失(AHL)的小鼠动物模型,探讨C57BL/6J小鼠发生AHL与毛细胞活性变化的关系。 方法: 按年龄段培育C57BL/6J小鼠,进行听性脑干诱发电位(ABR),及耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶染色,并行基底膜硬铺片,分段观察内外毛细胞线粒体琥珀酸脱氢酶的活性。 结果: C57BL/6J小鼠随年龄增大,ABR阈值明显增高,在3月龄到9月龄期间ABR平均反应阈值增大比较缓慢,差异无显著性意义;在10月龄大时,出现明显的听力下降,平均阈值比3月龄约高18-23 dB SPL,差异有统计学意义。10月龄后小鼠听力继续下降,21月龄时平均听阈比3月龄增大约60-68 dB SPL,差异有极显著意义。琥珀酸脱氢酶染色显示,随年龄增大,毛细胞线粒体活性丧失逐渐加重。先是底回外毛细胞活性下降,接着发生活性消失,并逐渐往顶回发展,最后累及内毛细胞。 结论: C57BL/6J小鼠具有典型的年龄相关性听力损失特点,其听力下降的原因可能主要是外毛细胞及内毛细胞活性的丧失引起,C57BL/6J小鼠可作为感音型老年性听力损失动物模型。


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