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RhoA/Rho激酶导致高脂血症白兔勃起功能障碍机制的研究

饶可  
【摘要】: 第一部分Rho激酶抑制剂法舒地尔改善高脂血症诱导勃起功能障碍白兔勃起功能的实验研究 目的:通过研究Rho激酶抑制剂法舒地尔改善高脂血症性勃起功能障碍新西兰大白兔阴茎勃起功能的效应,初步探讨Rho激酶在高脂血症诱导阴茎勃起功能障碍中的作用。 方法:50只雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组(25只)和实验组(25只),25只正常对照组白兔给予正常饲料连续喂养8周,25只实验组白兔给予含1%胆固醇的高脂饲料连续喂养8周。喂养前两组新西兰大白兔均检测血胆固醇浓度、体重、动脉血压和1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射前后海绵体内压力变化。喂养8周后重复检测上述指标。应用0.375mg/Kg、0.75mg/Kg、1.5mg/Kg法舒地尔直接阴茎海绵体内注射,检测两组白兔平均动脉血压和阴茎海绵体内压力变化情况。 结果:(1)喂养前,实验组和正常对照组白兔的体重和血总胆固醇水平无统计学差异。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191±3.142mmol/L)均明显高于喂养前(1.922±0.130Kg和3.166±0.093mmol/L)(P=0.000);正常对照组白兔的体重(2.109±0.145Kg)较喂养前(1.914±0.206Kg)明显增加(P=0.000),而血总胆固醇水平无明显变化。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191±3.142mmol/L)均明显高于正常对照组(2.109±0.145Kg和3.238±0.128mmol/L)(P=0.000)。(2)实验组白兔喂养8周后,1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高较喂养前明显下降(8.339±0.829mmHgVs 19.354±2.125mmHg)(P=0.000);正常对照组白兔喂养8周后,1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高与喂养前无明显变化;喂养8周后,实验组白兔1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高较正常对照组明显下降(8.339±0.829mmHg Vs 18.997±2.232mmHg)(P=0.000)。(3)不同剂量法舒地尔(0.375mg/Kg.0.75mg/Kg.1.5mg/Kg)海绵体注射后,实验组白兔阴茎海绵体内压增高分别为4.912±0.574mmHg.8.400±1.063mmHg、14.848±1.350mmHg,比正常对照组白兔阴茎海绵体内压增高的程度(3.336±0.889mmHg.5.465±0.609mmHg、11.952±1.290mmHg)更明显(P均为0.000)。 结论:Rho激酶抑制剂法舒地尔能够有效改善高脂血症性勃起功能障碍白兔的阴茎勃起功能,这种效应可能与Rho激酶活性上调有关。 第二部分高脂血症白兔离体阴茎海绵体平滑肌的收缩和舒张功能的变化 目的:研究高脂血症新西兰大白兔离体阴茎海绵体平滑肌的收缩和舒张功能的变化,探讨高脂血症导致阴茎勃起功能障碍发生的机制。 方法:将50只雄性新西兰大白兔随机分为实验组25只和正常对照组25只,25只正常对照组白兔给予正常饲料连续喂养8周,25只实验组白兔给予含1%胆固醇的高脂饲料连续喂养8周。8周后,两组白兔离体阴茎海绵体平滑肌肌条应用去氧肾上腺素诱导收缩,并记录肌张力的改变。再应用乙酰胆碱、硝普钠、法舒地尔诱导平滑肌肌条舒张,并记录肌张力的改变。 结果:(1)喂养前,实验组和正常对照组白兔的体重和血总胆固醇水平无统计学差异。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191±3.142mmol/L)均明显高于喂养前(1.922士0.130Kg和3.166士0.093mmol/L)(P=0.000);正常对照组白兔的体重(2.109±0.145Kg)较喂养前(1.914±0.206Kg)明显增加(P=0.000),而血总胆固醇水平无明显变化。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191士3.142mmol/L)均明显高于正常对照组(2.109±0.145Kg和3.238士0.128mmol/L)(P=0.000)。(2)实验组白兔离体阴茎海绵体平滑肌肌条在各剂量组去氧肾上腺素(0.5.1.5.10、50、100μmol/1)诱导下产生的收缩效应分别为4.36±1.20%、8.65±1.97%、13.17±3.10%、17.06±4.63%、24.49±5.01%和32.33±6.24%均明显高于正常对照组(1.12±0.29%、2.51±0.56%、4.40±0.77%、6.14±1.28%、7.61±3.40%和6.40±5.13%)(P=0.000)。(3)实验组白兔离体阴茎海绵体平滑肌肌条在1.10.100μmol/1剂量组乙酰胆碱诱导下产生的舒张效应分别为34.95±3.83%、45.58±6.07%和58.46±4.01%,明显低于正常对照组(47.44±3.94%、65.85±4.77%、75.36±4.18%)(P=0.000)。(4)实验组白兔离体阴茎海绵体平滑肌肌条在硝普钠诱导下产生的舒张效应与正常对照组差异无统计学意义。(5)实验组白兔离体阴茎海绵体平滑肌肌条在0.5、1、5、10μmol/14个剂量组作用下产生的舒张效应分别为1.83±0.49%、5.60±1.71%、10.20±3.40%和18.95±4.16%,明显低于正常对照组(4.31±1.33%、9.98±1.33%、16.10±2.23%和25.67±2.68%)(P=0.000)。 结论:高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌收缩功能增强,这种收缩功能增强可能与Rho激酶过度活化有关。高脂血症白兔阴茎海绵体同时合并内皮依赖的舒张功能减弱。上述变化参与高脂血症诱导勃起功能障碍的发生。第三部分RhoA/Rho激酶在高脂血症诱导勃起功能障碍白兔阴茎海绵体平滑肌中的表达 目的:研究RhoA/Rho激酶在高脂血症诱导勃起功能障碍新西兰大白兔阴茎海绵体平滑肌中的表达,探讨RhoA/Rho激酶在高脂血症诱导阴茎勃起功能障碍发生中的作用。 方法:将50只雄性新西兰大白兔随机分为实验组25只(含1%胆固醇的高脂饲料喂养8周)和正常对照组25只(正常饲料喂养8周)。喂养前两组新西兰大白兔均检测血胆固醇浓度、体重、动脉血压和1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射前后海绵体压力变化。喂养8周后再次检测上述指标。取两组新西兰大白兔阴茎海绵体平滑肌组织,应用Real-time RT-PCR和Western印迹法检测阴茎海绵体平滑肌组织中RhoA和Rho激酶的mRNA和蛋白表达在两组之间的差异。 结果:(1)喂养前,实验组和正常对照组白兔的体重和血总胆固醇水平无统计学差异。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191±3.142mmol/L)均明显高于喂养前(1.922±0.130Kg和3.166士0.093mmol/L)(P=0.000);正常对照组白兔的体重(2.109±0.145Kg)较喂养前(1.914±0.206Kg)明显增加(P=0.000),而血总胆固醇水平无明显变化。喂养8周后,实验组白兔的体重(2.454±0.214Kg)及血总胆固醇水平(22.191士3.142mmol/L)均明显高于正常对照组(2.109±0.145Kg和3.238士0.128mmol/L)(P=0.000)(2)实验组白兔喂养8周后,1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高较喂养前明显下降(8.339士0.829mmHg Vs 19.354±2.125mmHg)(P=0.000);正常对照组白兔喂养8周后,1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高与喂养前无明显变化;喂养8周后,实验组白兔1.5mg/Kg罂粟碱海绵体注射后诱导阴茎海绵体内压增高较正常对照组明显下降(8.339±0.829mmHg Vs 18.997士2.232mmHg)(P=0.000)。(3)荧光定量RT-PCR显示,RhoA mRNA在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达是正常对照组的0.95倍。Rho激酶1mRNA在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达是正常对照组的1.09倍。(4)Western印迹法显示Rho激酶2和胞膜结合RhoA蛋白在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达较正常对照组增高(P0.05),胞浆中RhoA蛋白在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达较正常对照组减低(P0.05)。Rho激酶1和总RhoA蛋白在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达与正常对照组无差异。 结论:高脂血症通过活化RhoA,激活Rho激酶2,诱导阴茎平滑肌收缩性增强,参与高脂血症诱导阴茎勃起功能障碍的发生。


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