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“超声增敏ADM”治疗乳腺癌的作用及机制

马小鹏  
【摘要】: 第一部分超声活化ADM产生活性氧的检测 目的:研究低频超声波是否不改变阿霉素(ADM)光谱特性,以及能否活化ADM产生活性氧。 方法:利用活性氧探针并借助荧光光谱分析超声活化ADM后活性氧的产生,并进一步利用荧光染色法测定人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM细胞内活性氧的水平。另外,比较超声干预前、超声干预后的ADM的吸收光谱曲线。 结果:超声干预前、超声干预后的ADM的吸收光谱曲线没有差异;而超声干预后的ADM溶液使得FCLA曲线峰值提高,但加入SOD以及NaN3后峰值降低;超声干预后MCF-7/ADM细胞、MCF-7/S细胞的DCF平均荧光强度分别为28.4±6.5、36.7±4.2明显高于相应的超声干预前的DCF平均荧光强度(16.5±1.8,19.3±2.9)(P0.05)。 结论:经过上述的三个实验,我们发现,一定波长强度的超声能产生单线态氧以及超氧阴离子自由基(实验2),并提高乳腺癌细胞内ROS的水平(实验3),而且并不改变ADM的分子结构(实验1)。 第二部分超声增敏ADM、逆转化疗耐药的检测 目的:研究低频超声波是否能增敏ADM化疗、以及逆转耐阿霉素的人乳腺癌细胞的化疗耐药。 方法:以人乳腺癌细胞MCF-7/S、人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM为研究对象,通过绘制细胞生长曲线、检测细胞内阿霉素浓度、检测耐药蛋白MDR1、P-gP的表达,以及检测细胞凋亡来验证低频超声波增敏ADM化疗、逆转化疗耐药的价值及机制。 结果:“超声+阿霉素”("US+ADM")对乳腺癌细胞(MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞)均有明显的抑制效应。‘'US+ADM"耐药细胞的IC50值为12.96,耐药逆转倍数3.76。分别测定细胞内阿霉素浓度发现:超声照射后MCF-7/S和MCF-7/ADM细胞内的阿霉素浓度明显上升。RT-PCR分析发现:"US+ADM"处理组MDR1 mRNA. MRP1 mRNA的表达水平明显降低,低于单纯ADM组和空白对照组(P0.05);Western blot检测发现:‘'US+ADM"处理组的P-gp蛋白、MRP1蛋白的表达水平明显低于单纯ADM组和空白对照组(P0.05);AO/EB荧光染色后细胞形态学观察显示:超声干预后细胞凋亡明显增加,与对照组相比有显著的统计学差异(P0.05)。 结论:“超声+阿霉素”能明显抑制细胞表面耐药标志物P-gp、MRP1的表达。“US+ADM”提高了MCF-7/ADM及敏感株MCF-7/S的细胞内阿霉素的浓度。超声对MCF-7/ADM及MCF-7/S的细胞增殖具有一定的抑制作用;并且具有逆转耐药的生物学效应。 第三部分超声增敏ADM化疗对鼠乳腺癌移植瘤的作用 目的:观察"US+ADM"对小鼠乳腺癌的治疗效果。 方法:在BALB/c小鼠右腋皮下注射MA782细胞,制作鼠乳腺癌移植瘤,成功建模鼠40只,随机分成单纯超声组、US+ADM组、单纯ADM组以及空白对照组,每组10只;予以相应干预后观察移植瘤生长情况以及小鼠的存活情况,绘制移植瘤生长曲线以及小鼠的生存曲线,从而探讨超声增敏ADM化疗对鼠乳腺癌的治疗效果。 结果:US+ADM组的小鼠移植瘤生长受到显著抑制,与单纯ADM组比较,差异有统计学意义(P0.01);US+ADM组的小鼠整体存活时间较单纯ADM组延长,(P0.05)。单纯ADM组则表现出一定的抗肿瘤作用,移植瘤生长较慢;而单纯超声干预几乎没有抑制作用。 结论:超声增敏ADM化疗对小鼠乳腺癌移植瘤的生长有抑制作用,能够延长乳腺癌小鼠的生存时间。


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