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蛋白A-藻蓝蛋白β亚基双功能蛋白的性质及其在免疫检测中的应用

谢冰清  
【摘要】: 免疫测定技术的应用遍及医学检验、环境监测、食品检验等诸多领域,尤其是其分支之一标记免疫测定技术自1959年创立以来迅速发展。对于能使测定过程更简单、快速新型免疫标记物的开发一直是研究的热点,标记物的灵敏度、特异性和安全性决定了其实用价值。本研究中所利用的藻蓝蛋白的特殊物理及光学性质就使之十分适合作为荧光免疫的标记物。 在本研究中,将金黄色葡萄球菌的总DNA作为模板,通过聚合酶链式反应扩增出目的片段即金黄色葡萄球菌蛋白A基因(spa),并通过酶切位点的转换成功构建表达载体pET-spa。其后,利用实验室已经成功构建并保存的质粒pET-cpcB,构建能表达融合蛋白SPA-CpcB融合质粒pET-spa-cpcB。 将构建的SPA-CpcB融合基因与两种藻胆色素(藻蓝色素和藻红色素)分别和藻胆蛋白裂合酶CpeS进行体内共表达,并检测表达产物的荧光活性。将SPA-CpcB与生物素标记的兔抗体进行荧光免疫反应并通过多功能微孔板荧光检测仪检测。结果表明融合蛋白SPA-CpcB同时具有两种蛋白的生物活性。 利用PEB-SPA-CpcB来检测包被于聚苯乙烯微量反应板的All5292蛋白,证实了融合蛋白与色素结合后确可用于免疫检测。 重组产物色素蛋白PEB-SPA-CpcB有藻胆蛋白特殊的荧光特性,又具有蛋白A能与多种哺乳动物血清中的IgG的Fc段结合的特点,可作为光谱二抗应用于荧光免疫检测中。以此为基础,可尝试开发一种简便可靠的新型免疫亲和试剂。


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