ALV-J动物疾病模型的建立及囊膜基因分析

【摘要】：2009年湖北省荆州地区产蛋鸡群发生了J亚群禽白血病流行,为探讨该病毒的生物学特性,本研究利用ALV-J HB2009株采用12日龄土鸡胚血管接种,实验感染了地方土鸡,建立了ALV-J蛋鸡的动物疾病模型。ALV-J HB2009接种鸡胚孵化后饲养至14周龄时采血进行特异性PCR检测和病理学观察。至16周龄时出现了ALV-J典型的髓细胞性白血病病例。病理学观察表明ALV-J HB2009株诱发了髓细胞性白血病和血管肉瘤。 利用ADOL设计的位于pol基因终止密码上游和长末端重复序列3’末端的特异性引物对HB2009的env基因进行了PCR扩增,结果呈现阳性,获得大小约为2.2kb的特异性片段。将扩增产物进行测序,并对其DNA核酸序列进行了同源性分析,结果显示扩增产物与J亚群毒株间有85.5%～98.0%的同源性,与原型株HPRS-103同源性达92.5%,与美国毒株同源性为85.5%-95.1%。将ALV-J HB2009株与国内其他6个毒株(IMC10200、SDC2000、SD9901、YZ9901、SD071LK1、SDo001)进行比较分析,扩增区域病毒的前DNA同源性除了与SD071LK1仅为89.8%以外,与其他5个国内毒株病毒同源性达93.4%以上。 对HB2009病毒囊膜蛋白氨基酸序列与其他已发表的ALV-J的囊膜蛋白氨基酸序列进行同源性比较与分析,结果显示HB2009株预测的env编码氨基酸序列与其它ALV-J毒株相应序列的同源性达87.5%～96.3%,与IMC10200株和SDC2000株同源性较高,达96.3%,与原型株HPRS-103的同源性达90.5%,与美国的1696株、6803株、6827株和AF88株同源性相对较低,分别为87.5%、88.5%、87.9%和89.1%。其生物进化树分析显示,在已发表ALV-J毒株里中,HB2009株变异幅度位于AF88株和IMC10200之间。 将HB2009株的囊膜基因翻译的氨基酸序列与所选ALV-J对应的序列进行分析。从预测的蛋白质序列来看,HB2009株在整个env存在着不同程度的变异现象,且这些变异现象所在的基因位点与其它选取的毒株变异的位置规律基本一致,主要集中在env基因SU区的vr3、hrl和hr2区。多数氨基酸位点的变异是由于碱基置换所引起。碱基插入性突变仅为2处,在位于高变区hrl的第114-115氨基酸位和高变区hr2的第194～196氨基酸位分别发生了ES(色氨酸、丝氨酸)氨基酸残基的“插入性”突变和NLS(天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸)氨基酸残基的“插入性”突变。 对产蛋鸡群ALV-J流行株进行致病性和毒株变异性等生物学特性进行研究具有重要的现实意义,尤其是地方土鸡不断出现ALV-J的流行表明,ALV-J对土鸡的致病性在不断增强。