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硅基质膜吸附能力的再生研究以及一种蛋白质预染marker新工艺的开发

刘传青  
【摘要】:21世纪是生物科学的世纪,进入21世纪以来生物科学的新进展,新成就如雨后春笋,层出不穷。达尔文进化论的建立,对生物学及其他有关学科的发展产生了重大影响;孟德尔遗传定律的提出,对生物遗传学的发展指明了方向;近现代,DNA双螺旋结构的提出以及人类基因组计划标志着生物学的发展越来越趋于国家化。 生物学发展到今天,微观和宏观两个方向是生物学发展的主要方向:在宏观方面,生物学的发展在为解决区域性和全球性的资源利用和环境保护等问题提供了许多中解决的方法;在微观方面,主要是指分子生物学和细胞生物学的研究发展,从而更好的解决人类疾病等病因问题。 众所周知,大到国家级甚至世界级的生物科学合作研究,小到一些基础生物学的实验研究,生物学的研究发展都离不开强大的经济实力做后盾。为了降低实验室的实验成本,本实验将从核酸提取和蛋白染色两个方面探究如何降低基础生物学实验的研究成本。 核酸提取:对市场上质粒提取试剂盒中吸附柱可重复性利用性进行了初步的研究。探讨了不同溶液、不同保存时间、不同pH值、不同离子浓度以及不同温度浸泡吸附柱对恢复吸附柱再吸附能力的影响。结果表明:吸附柱使用后经过一定的处理可以有效地恢复其对质粒DNA的再吸附能力。最佳处理条件是:pH=2.04、浓度为0.01M的PBS缓冲液、4℃保存6天时间。经过处理,吸附柱的再吸附能力相对于吸附柱第一次吸附能力有些增强。 蛋白染色:利用工业化的活性染料对商品化的蛋白样品进行染色处理,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析染色效果,结果表明:活性染料中的活性艳蓝对蛋白有较好的染色效果,而其它酸性染料则对蛋白质没有明显的染色效果;活性艳蓝对蛋白最佳的染色条件为:50℃水浴,染色10min效果最好,并且染色时间对染色效果影响不大,染色效果主要取决于染色的温度;活性艳蓝并不是对所有蛋白质都有一个很好的染色效果,例如,对胰蛋白酶活性艳蓝染料无法对其进行染色;透析处理蛋白染色溶液可以得到较为纯净的单一条带预染蛋白条带,通过几种不同蛋白的混合可以粗略的得到商品化预染marker的效果。 通过本次实验研究,初步探讨了市场化的质粒提取试剂盒中的吸附柱重复利用的可能性,以及实验室粗略自制蛋白质预染marker的可能性。吸附柱吸附能力的恢复得到了明显的效果,而关于蛋白质染色还需要继续探讨有关蛋白以及有关化工染料的染色效果。


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