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多杀菌素的提取纯化工艺研究

秦为辉  
【摘要】:本论文首先建立了多杀菌素的高效液相色谱检测方法,该法能准确地测定多杀菌素的浓度。通过对发酵液中多杀菌素的理化性质进行探索,结果表明,多杀菌素在中性、偏碱性条件下比较稳定,强酸性条件下稳定性差;在20~70℃温度范围内,具有较高的热稳定性。发酵液pH为10时,多杀菌素提取效果较好。有机溶剂萃取试验中,选择乙酸乙酯为适宜萃取剂,萃取体积约为等体积的提取液体积,以萃取3次最佳。 本论文研究了多杀菌素的超声波提取工艺,并依据中心复合旋转设计原理,在单因素试验的基础上,采用三因素五水平的响应曲面分析法,考察了提取时间、料液比和提取频率对多杀菌素浓度的影响。结果表明:优化后的提取条件为:提取频率75kHZ,提取时间74min,料液比1:1.5。在此提取条件下,多杀菌素的浓度相对较高,可达到100.75μg/mL。 多杀菌素提取液经大孔吸附树脂吸附后,选用丙酮/水洗脱,结果表明,在70%~95%丙酮/水洗脱范围内,多杀菌素被大量地洗脱,回收率可达80.72%。以硅胶薄层色谱初步筛选硅胶柱层析分离条件,在此基础上,采用石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱,以TLC跟踪检测多杀菌素,结果取得了较好的分离效果,多杀菌素纯度达到90%~95%。 考察了阴离子交换树脂对多杀菌素提取液的脱色效果,实验结果表明,优化后的脱色工艺条件为:脱色时间3h,树脂添加量为4%(g/V),摇床转速150r/min,脱色pH10,在以上操作条件下,201×7型树脂对多杀菌素提取液的脱色率可达到80%以上,而多杀菌素损失率仅为2%左右。脱色后的产品在色泽上有明显改观,基本能达到生产要求。


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