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茶皂素提取、纯化及其抗菌活性的研究

金月庆  
【摘要】: 本论文对茶皂素测定方法及从油茶饼粕中提取、纯化茶皂素的工艺进行了研究,并对茶皂素抗菌活性进行了初步研究。 采用香草醛-浓硫酸显色法对茶皂素含量的测定进行了研究。研究结果表明:最大吸收波长为520nm,8%的香草醛无水乙醇溶液、4ml的77%浓硫酸用量、水浴温度60℃、水浴时间20min的条件下测定效果最佳,相对标准偏差为1.57%,平均回收率为99.26%,并通过干扰物质排除试验得出,热水浸提液中杂质对显色影响较大,而乙醇浸提液中杂质对显色基本没有影响,所以确定后续乙醇浸提液中的茶皂素含量测定采用该显色方法。 油茶饼粕中茶皂素提取工艺的研究。通过对三种常见提取方法的比较,确定采用超声波辅助的水提醇萃法提取茶皂素。采用响应面分析方法优化水提醇萃的超声辅助提取条件。利用中心组合设计研究液固比、浸提温度、超声浸提时间、超声功率四个自变量对响应值茶皂素含量的影响。用SAS8.1软件进行结果分析。响应面的典型分析可知稳定点是最大值。水提醇萃法提取茶皂素最佳工艺条件为:液固比为4.1:1,浸提温度为80℃,超声浸提时间为3.3h,超声功率为725W,85%乙醇萃取,85%乙醇与浓缩液体积比4:1,萃取温度75℃,萃取时间2h,所得茶皂素含量达到80.51%。同时,本论文还探讨了一种新的方法-水提发酵法提取茶皂素,并对影响其提取效果的因素进行了研究。研究结果表明最佳提取条件为:液固比4:1、浸提温度80℃、浸提时间4.5h、酶a添加量3‰、酶b添加量3.5‰、酵母液与待发酵液体积比1:10,并将水提发酵法与水提法、超声辅助的水提醇萃法的提取效果进行了比较,得出水提发酵法较水提法所得茶皂素含量有很大幅度的提高,得率相差不大;与超声波辅助的水提醇萃法相比所得茶皂素的含量略低,得率有所提高,但所得产品品质还有待提高。 采用大孔树脂对乙醇浸提的茶皂素进行进一步的纯化。通过对七种树脂的筛选,确定选择AB-8树脂进行纯化。研究各因素对AB-8树脂吸附、解吸效果的影响,得出AB-8纯化茶皂素的较佳吸附条件:上样液中茶皂素浓度34.4mg/ml、吸附温度25℃、吸附时间100min;较佳脱附条件:脱附温度30℃、洗脱液乙醇浓度80%、洗脱液与上样液体积比4:1、脱附时间80min,在此条件下茶皂素的吸附率90.70%、总洗脱率85.47%,茶皂素含量85%。 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌是食品生产、加工、贮藏中常见的腐败菌种,通过茶皂素对这三个菌种抑制效果的研究,得出茶皂素对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌具有较好的抑制效果,对金黄色葡萄球菌基本无抑制效果。


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