稻瘟病生防菌Af1、Af4的初步研究

【摘要】： 从水稻叶片上分离得到两株生防细菌,将其分别命名为：Af1、Af4。本实验研究内容主要包括：1.通过培养特征、形态学特征、生理生化特征以及16S rRNA序列同源性分析对拮抗菌Af1、Af4进行鉴定。2.通过对稻瘟病菌丝生长的抑制实验、对孢子萌发的抑制实验、广谱抑菌实验以及不同培养时间、不同浓度、不同pH值的发酵液对稻瘟病菌的拮抗性测定等实验对Af1、Af4进行抑菌活性鉴定。3.按照蛋白和脂肽类抗生素分离纯化方法定向地对Af1、Af4发酵液活性物质进行提取,获得粗提物质,并对粗提物质的生化特性进行研究,最后对脂肽类抗生素合成相关基因进行检测。4.水稻叶片离体接种实验,对Al1、Af4进行生物防效测定。 结果表明：1.通过鉴定表明Af1、Af4两个生防菌株同为枯草芽孢杆菌,两者的理化特征大致相似,但是Afl能够产生色素,而Af4不能够产生色素。2.Af1对稻瘟病菌的抑菌半径达到22 mm,Af4对稻瘟病菌的抑菌半径达到23 mm；Af1和Af4均能抑制稻瘟病孢子的萌发,当发酵液浓度为1：1(50%)时,抑制率最高分别可达到88%和92%,当浓度降低到1：124(0.8%)时,抑制率则为16.4%和46%；Af1、Af4具有广谱抑菌作用,除Af1对水稻纹枯病无作用外,Af1、Af4对稻瘟病菌、稻曲病菌等十种供试病原菌均具有抑制作用；Af1、Af4的发酵液在不同浓度梯度检测,均具有抑菌活性；Af1在发酵液培养5 d时抑菌活性最高,而Af4在3 d-4d抑菌活性最高,且两者都耐高温；两者均不能耐酸性环境,适宜在中偏碱性的环境下生存,Afl在发酵液pH 8时,抑菌活性最高,Af4在pH 7时有较高抑菌活性。3.Af1产生多种类型的抗真菌物质,其中包括蛋白质和抗生素,抗生素粗提物对温度、蛋白酶K不敏感,而蛋白质粗提物对蛋白酶K敏感,对温度不敏感,并能够抑制稻瘟病菌黑色素的形成；Af4发酵液粗提物与脂肽类抗生素一致,对温度、对蛋白酶K不敏感；从Af1中检测到fenB、sfp、ituA三个脂肽抗生素合成相关基因,而从Af4中检测到mycB、fenB、sfp、ituA四个脂肽抗生素合成相关基因,表明两个菌株都能够合成抗生素类物质。4.生物防效测定结果表明,菌株Af1,Af4发酵液在不同浓度梯度下均具有生防效果,且Af1的生防效果要略好于Af4的生防效果,二者在1：249低浓度下仍具有防病效果,且效果持续稳定。