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乙型脑炎病毒对小鼠组织的嗜性及影响的形态学研究

孙艳芳  
【摘要】:日本乙型脑炎病毒是黄病毒科黄病毒属的成员之一,具有嗜神经性,其引起的日本乙型脑炎是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒性疾病。疫苗接种是控制乙脑的可靠方法。目前对乙脑尚无特异性疗法,主要是支持疗法和对症治疗。乙脑的致病机理研究对从根本上控制乙脑至关重要。然而,乙脑的致病机制目前仍不十分清楚。本研究以小鼠为试验模型,研究了乙脑病毒在小鼠体内分布及其对脑、脾脏等脏器的组织病理学影响。本论文主要从以下方面进行了研究: 1.乙脑病毒对小鼠各器官的组织病理学影响 本试验以SPF级4周龄雌性BALB/c小鼠为试验动物,用组织病理学方法检测乙脑病毒对小鼠各组织器官结构的影响变化。结果显示:当乙脑病毒感染后,病理变化主要发生在脑和脾脏。在小鼠脑内,呈现非化脓性脑炎病变。组织学表现为神经元坏死、血管管套现象、胶质细胞结节。在感染组小鼠脾脏中,白髓面积增加,红髓面积相对减少,且白髓增加与红髓减少的改变随时间呈现一定的规律。即从感染后的2d至4d,脾脏有淤血现象。感染后第6d,白髓面积轻微增加,红髓面积相对少量减少。感染后第8d至10d,白髓面积明显增加,且白髓内淋巴细胞明显增多,红髓面积相对明显减少。在感染组小鼠脾脏中还观察到坏死现象。在正常对照组,小鼠脾脏未见明显病变。小鼠其他器官如肝脏、胸腺、肾脏、肺脏、皮肤、胃的组织学结构并未发现明显异常。结果验证了乙脑病毒的神经嗜性,且对其他组织影响较小。脾脏内淋巴细胞数量的改变表明淋巴细胞可能在乙脑病毒体内外周组织中的游走起到一定作用。 2.乙脑病毒对小鼠脑的IHC与凋亡分析 利用IHC法研究了乙脑病毒对小鼠脑的影响。研究结果表明乙脑病毒P3强毒株对神经元有直接侵染作用,引起小鼠脑呈现明显的神经炎症变化,免疫组织学具体表现为多数星形胶质细胞突起拉长、伸展,呈现出抵御乙脑病毒的激活状态,尤其是海马部位的星形胶质细胞激活明显。小胶质细胞突起伸展,也呈现出明显的抵御乙脑病毒的激活状态。这些神经炎症会对神经元起到一定的保护作用,然而过度的神经炎症又会进一步促进神经元损伤。 采用TUNEL凋亡法,对小鼠感染乙脑病毒P3强毒株后的脑内凋亡进行了研究。研究发现脑中血管内皮细胞呈现较强的标记荧光信号,表明脑的血管内皮细胞在乙脑病毒的影响下有明显的凋亡作用。此结果对解释乙脑病毒突破BBB的途径有一定意义。 3.乙脑病毒对小鼠脾脏的I HC与凋亡分析 小鼠颈部皮下接种日本乙型脑炎病毒P3强毒株,并用IHC法CD3+抗体检测T淋巴细胞。结果分析显示,T淋巴细胞的数量在感染后第0d至3d减少,3d到7d增加,7d到10d再次显著性降低。此外,神经症状出现在感染后6d。上述结果提示,细胞免疫在对抗日本乙型脑炎病毒的第一期病毒血症中起着至关重要的作用,而免疫反应在第一期病毒血症期免疫抑制后激活,且神经功能障碍在细胞免疫激活时出现。结合结果中T淋巴数目第7d至10d显著性减少和神经症状出现在感染后6 d,可以推测T淋巴细胞在乙脑病毒转移至脑可能发挥了一定的作用,脾脏T淋巴细胞在感染后第8d至10d显著减少可能是脾脏T淋巴细胞受损或转移至血,甚至入脑。乙脑病毒很可能通过T淋巴细胞进入中枢神经系统并引起神经症状。T淋巴细胞转移至脑发挥其免疫监视作用,对出现神经炎症的小鼠起到保护作用,避免其死亡。然而,如果细胞免疫不足,进入脑的T淋巴细胞反而能够加剧神经炎症,并导致乙脑病毒在T淋巴细胞中潜藏。感染后神经症状出现的第六天是第一期病毒血症过渡至第二期病毒血症的关键点。一旦乙脑病毒突破BBB,神经元开始受到威胁,小胶质细胞和星形胶质细胞可能开始防御性激活。巨噬细胞免疫组织学结果中脾脏中巨噬细胞增加,表明对脾脏内坏死的细胞起到吞噬作用,也提示处于向脑中转移的准备阶段。本章研究结果显示了小鼠日本乙型脑炎病毒感染后特有的免疫病理变化,并进一步丰富了日本乙型脑炎免疫病理机制。 采用TUNEL凋亡法,对小鼠感染乙脑病毒P3强毒株后的脾脏内凋亡情况进行了研究。研究发现脾脏在乙脑病毒的影响下,并没有产生明显凋亡。本章研究结果符合病毒侵入体内淋巴细胞不凋亡,只对其他组织如脑的凋亡起调节作用的说法。脾脏中T淋巴细胞的升降规律一定程度上反应了淋巴细胞对其他组织凋亡的调节作用。脾脏因自我更新,在正常情况下淋巴细胞存在凋亡现象,感染组脾脏内淋巴细胞凋亡情况和正常组无明显差别,可推测乙脑病毒作为一种外来感染,在脾脏凋亡方面的作用不明显。在大多数病毒感染中,宿主免疫系统可能会诱导凋亡,从而促进病毒清除。


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