J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及初步应用
【摘要】:禽白血病(Avian leukosis, AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤。J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是90年代初期分离并鉴定的一个新的亚群,其传播性和致病性都比其他亚群强,可引起鸡的髓细胞瘤,给全球养鸡业带来巨大的经济损失。近几年,国内部分省市出现大规模的禽白血病感染病例,主要以J亚群病毒感染为主。病毒的gp85基因是J亚群区别其它亚群的特异性序列。木研究利用原核表达系统表达ALV-Jgp85蛋白,建立J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗gp85蛋白的单克隆抗体。为我国J亚群禽白血病的血清监测和抗原诊断试剂盒的开发奠定了基础。研究结果如下:
(1)根据GeneBank中ALV-J的gp85基因序列设计针对J亚群病毒的特异性引物,以本实验室保存的ALV-J XT0908毒株为模板,用RT-PCR方法扩增目的片段,测序结果显示gp85基因片段与GeneBank中部分ALV-J核苷酸序列同源性在93.6%-98.2%。构建重组质粒pET-28a(+)-gp85,表达目的蛋白,使用His-镍亲和层析柱进行纯化。
(2)用gp85蛋白作为包被抗原,建立J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法,并对该方法进行评价。结果表明该检测方法重复性良好,与禽源的几种病毒和细菌阳性血清均无交叉反应,并利用建立的ELISA抗体检测方法对临床血清样品进行检测,与IDEXX公司生产的抗体检测试剂盒符合率达到96.29%。。
(3)用gp85蛋白免疫Balb/C小鼠,将SP2/0骨髓瘤细胞和免疫脾细胞进行融合,阳性孔采用有限稀释法进行亚克隆,并对杂交瘤细胞进行鉴定。将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔制备腹水。用辛酸-硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化。结果表明,获得5株杂交瘤细胞:1G4、1B9、3A1、3D12、5G5。杂交瘤细胞上清抗体效价均在27以上,腹水抗体效价均在100×27以上,染色体数目均在79-93之间。Western-blotting鉴定结果表明,5株单克隆抗体均可以与gp85蛋白发生特异性反应。
|
|
|
|
1 |
凌育焱;禽白血病病毒研究新进展[J];畜牧兽医科技信息;1998年17期 |
2 |
靳艳玲;罗薇;;禽白血病研究进展[J];西南民族大学学报(自然科学版);2005年S1期 |
3 |
DrkongSonchiu,周剑峰;禽白血病病毒J亚群[J];山东家禽;1999年05期 |
4 |
冯小宇;徐镔蕊;Lucy F.Lee;Maoxiang Li;;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离与初步鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期 |
5 |
孙淼;李金彩;郭振华;曹红;常建宇;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[J];中国兽医杂志;2009年10期 |
6 |
石文慧;韩新影;康亚男;卢军霞;吕蔚;杨润德;刘艳琴;;禽B型白血病病毒的分离及分子分型鉴定[J];动物医学进展;2010年10期 |
7 |
秦爱建,刘岳龙,周绮雯,黄维嘉;J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果[J];中国预防兽医学报;2001年03期 |
8 |
刘超男;;致血管瘤型J亚群禽白血病病毒的基因组序列分析[J];中国病理生理杂志;2010年10期 |
9 |
刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒研究进展[J];中国兽医学报;2000年06期 |
10 |
刘公平,赵振芬,刘福安;A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达[J];中国病毒学;2001年03期 |
11 |
祝丽;张玲娟;孙磊;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];中国动物检疫;2009年04期 |
12 |
蔡丽娅;秦爱建;;我国禽白血病病毒生物学特点及其控制[J];中国兽药杂志;2009年11期 |
13 |
秦爱建,崔治中,Lucy Lee,Aly Fadly;禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析[J];中国病毒学;2001年01期 |
14 |
范书才;李虹;肖睿;;禽白血病-肉瘤病毒的RT-PCR检测[J];中国兽药杂志;2006年06期 |
15 |
范书才;李虹;肖睿;;禽白血病病毒分离鉴定[J];中国兽药杂志;2006年09期 |
16 |
侯磊;高宏雷;高玉龙;祁小乐;王笑梅;张淼涛;;ALV-J分离株Hrb-1 gp85基因蛋白的原核表达及多克隆血清的制备[J];黑龙江畜牧兽医;2009年08期 |
17 |
刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定[J];中国预防兽医学报;2001年01期 |
18 |
秦爱建,LEE LUCY;禽白血病病毒J亚群重组囊膜蛋白基因的表达效果[J];中国兽医学报;2001年05期 |
19 |
刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达[J];中国病毒学;2001年01期 |
20 |
杨玉莹,叶建强,赵振华,秦爱建,顾玉芳;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[J];中国病毒学;2003年05期 |
|