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桃砧木毛桃离体培养和植株再生的研究

白芝兰  
【摘要】:建立高效稳定的离体再生体系是进行遗传转化的基础和前提。桃的离体再生较为困难,很大程度上阻碍了桃现代生物技术育种的进程。本试验以南方桃区主要砧木毛桃(Prunus persica)为试材,利用茎段离体培养获得的无菌苗叶片为外植体,通过对基本培养基类型、激素种类和浓度配比,碳源和暗培养时间等一系列因素的研究,初步建立了桃砧木毛桃叶片离体再生和愈伤组织诱导、保存及植株再生体系,为桃后续的遗传转化研究奠定了一定的基础。主要研究结果如下: 1.2010年5-6月进行毛桃茎段腋芽诱导,萌发率可达76.6%,且生长状况良好。毛桃试管苗较适宜的增殖培养基为:LP基本培养基+6-BA0.75mg/L+IBA0.30mg/L+腺嘌呤3.00mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.8g/L,pH为5.8-6.0,每隔30d左右继代一次。 2.在毛桃叶片植株再生时先进行21d的暗培养后更换到新鲜培养基进行光培养,暗光培养时培养基均为:SH基本培养基+TDZ3.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L,pH为5.8-6.0,最高再生率可达11.67%。 3.毛桃试管苗较适宜的生根培养基为:1/2LP基本培养基+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.8g/L,pH为5.8-6.0。培养30d生根率可达73.34%,平均每棵试管苗生根条数为3条,平均根长为4.81cm。 4.毛桃叶片愈伤组织诱导较佳培养基为:LP基本培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D3.0mg/L+AgN030.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L,pH5.8-6.0,选取继代30d左右的毛桃试管苗的幼嫩茎段(不带腋芽)或叶片作为外植体,暗培养21d后转移至光培养。 5.毛桃愈伤组织继代保存的较佳培养基为:LP基本培养基+2,4-D1.5mg/L+CH0.4g/L+CA3.0g/L或PVP3.0g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂5.8g/L,pH5.8-6.0,每28d继代一次,持续暗培养进行保存。


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