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山金柑纯系及遗传转化平台构建

赵菲  
【摘要】:柑橘中的金柑属在我国栽培历史悠久,是柑橘中重要的种质资源之一。山金柑(Fortunella hindsii Swingle)属于金柑属,是芸香科常绿野生果树,其植株矮小,童期短,实生苗一至两年便可开花结果,且有单胚和多胚两种类型,是理想的研究材料,有望作为柑橘果树的模式植物。本研究以野生单、多胚山金柑为主要研究材料,尝试花药培养和常规育种方法获得山金柑纯系,通过SSR检测分析不同个体、不同世代山金柑的纯合度差异,并比较了不同株系山金柑以及不同培养方式对山金柑再生和转化效率的影响,对其转化体系进行了优化。主要研究结果如下:1.2012年和2013年对种植在华中农业大学柑橘资源圃的单胚山金柑进行连续的花期套袋,使其自交,得到自交材料的S1代、S2代。对其进行SSR进行分析,共采用了分布于9条染色体上的31对标记,分析其纯合度。目前获得纯合度最高的植株可达到93.5%;另外对S2代所有样品的标记位点在群体中的纯合度情况进行了分析,9条染色体中平均纯合度最高的为6号染色体,其次为3号和5号染色体。2.S2代中编号为34、35、36、48、49的植株已经开花,继续对其进行自交,获得自交种子,播种后获得S3代。3.对不同世代间山金柑纯合度分析结果表明,自交后代个体纯合度并不一定高于亲代,但其整体纯合度呈增加趋势。随着其纯合度增加,植株生活力表现出下降趋势,这种现象是否与自交衰退有关还需进一步研究。4.在2013年和2014年6月至10月期间以单、多胚山金柑花药为材料,培养花药10000枚以上,仅有1/2MT+0.1mg/L NAA+活性炭的培养基上有少量愈伤组织长出。5.选取12个不同地区采集的山金柑株系为材料,对遗传转化主要影响因子设置不同梯度,利用荧光显微镜观察抗性芽,计算生芽率和阳性率,比较不同处理下山金柑的再生率和转化率。结果显示,选用QK、ZQ、GZ等基因型的外植体,黄化苗光培10d左右,共培养后暗培养5-7d,农杆菌液OD值在0.7左右,是山金柑较为适宜的遗传转化条件。同时,适当增加茎段长度和侵染时间,通过划伤口处理等可以在一定程度上增加其再生率。


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