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猪乙型脑炎减毒活疫苗与基因免疫研究

王祥  
【摘要】: 乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE),是由黄病毒科的乙型脑炎病毒(JE virus,JEV)引起的人和动物共患的一种虫媒病毒性疾病。本病对人类危害巨大,是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一;对猪可引起繁殖障碍,给养猪业造成巨大的经济损失。猪是本病毒的扩增宿主,带毒猪是本病的主要传染源。因此,防制猪患乙脑不但可以减少养猪业的损失,而且也是防止人患乙脑的重要措施。本研究着眼于猪乙脑快速诊断方法和疫苗的开发利用,主要工作包括: 1.减毒活疫苗的研究 选用原代金黄地鼠肾(PHK)细胞作为培养基质,JEV SA14-14-2毒株为生产用疫苗毒株进行疫苗研制。测定表明SA14-14-2毒株能在PHK细胞上进行稳定增殖,且有较高的滴度(≥10~(-7.2TCID_(50)/1.0mL)。采用蔗糖明胶作为冻干保护剂,冻干后毒价≥10~(-6.8)TCID_(50)/1.0mL。 疫苗原液接种血清学阴性小白鼠和妊娠母猪,小鼠无死亡和异常反应,怀孕母猪无流产和产死胎、木乃伊胎,均正常分娩,胎儿发育正常,说明疫苗是安全的。 免疫原性测定说明,该疫苗能引起小鼠产生特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答;40日龄仔猪免疫后可产生JEV特异性抗体。 疫苗在4-8℃和.20℃可保存一年半。 综上,该疫苗安全,免疫原性好,且便于大规模生产。 2.滴金免疫法(DIGFA)的建立与应用 将浓缩的JEV抗原吸附到硝酸纤维素膜上,加入JEV阳性、阴性血清和红色胶体金颗粒标记的兔抗猪IgG探针,摸索最佳工作条件,结果表明硝酸纤维素膜上最佳抗原吸附浓度为0.147mg/mL,最佳探针浓度为1∶20,最佳封闭浓度为5%BSA。用该法与HI试验对比检测54份送检猪血清,两法总符合率为81.4%,阳性符合率为71.4%,阴性符合率为65%,其敏感性比HI高,整个过程可在数分钟内完成。 因此,DIGFA具有快速、简便、敏感、特异的特点,可用于实验室和现场JEV抗体的检测。 3.prM、E和NS1基因片段的克隆表达与基因免疫 从自行研制的乙脑减毒活疫苗中提取JEV基因组RNA,合成3对引物,以一步法RT-PCR技术扩增获得了3个主要免疫原性基因片段的编码序列,大小分别为prM(558bp)、E(615bp)、NS1(1146bp),其中prM和NS1为全基因,E为前1/3(N端)片段。以pMD18-T为克隆载体,得到3个克隆质粒pTprM、pTE、pTNS1。构建3个基因的原核表达载体,实现了NS1基因在BL21(DE3)菌株中的高效表达,Western-blot检测表达的NS1蛋白具有生物活性。 以质粒peDNA3 .1为载体,构建3个基因的核酸疫苗质粒,均实现了在真核细 胞BHK一21中的表达,且表达产物具有生物活性。核酸疫苗质粒免疫的小鼠产生了 特异性的体液免疫反应和细胞免疫反应。从效果上看,三基因联合免疫最好,单基 因以NSI为好。 4. TK-/gG很51十重组病毒的构建 设计1对引物从p翎S1上亚克隆Nsl基因,将NSI基因插入到中间转移载体 pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK~NSI。将pUSK一S1与伪狂犬病毒Ea株 TK一G,/ Lacz+突变株共转染真核细胞IBRS一2,通过空斑纯化得到了乙脑病毒NSI 基因重组伪狂犬病毒TK一G水51+。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NSI 蛋白。 该重组病毒可作为猪乙脑和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。


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8 丁俊然,刘风海,刘桂春;貂乙型链球菌的诊断[J];中国兽医杂志;1984年12期
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14 ;五号病乙型鼠化弱毒疫苗对云南水牛安全效力试验报告[J];畜牧兽医科技;1979年01期
15 郑武飞;严滌;祁敏如;;天津市一例流行性“乙型”脑炎及其病毒的分离与鉴定[J];微生物学报;1955年01期
16 汪美先;甄桂芳;徐汉杰;;西安市居民家畜家禽流行性乙型腦炎隐性感染的調查研究[J];微生物学报;1956年02期
17 鲁茂龙,黄君霆,蔡幼民,甘人宝,吴祥甫,蒋海燕;天蚕抗菌肽基因的克隆及重组病毒的纯化[J];蚕业科学;1992年04期
18 杨明凡;崔保安;陈红英;张素梅;魏战勇;李祥瑞;;鸡传染性喉气管炎病毒gD基因在重组痘病毒中表达及其免疫效力[J];南京农业大学学报;2009年01期
19 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;邹啸环;黄耕;李彦舫;;犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达[J];畜牧市场;2009年09期
20 A.Finkelstein;赵有;;禽用重组活疫苗的研究现状[J];中国畜牧兽医;1991年01期
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1 王祥;猪乙型脑炎减毒活疫苗与基因免疫研究[D];华中农业大学;2001年
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4 王晓黎;乙型肝炎病毒DNA逆转录酶基因特异基因变异检测方法的建立及评价[D];河北医科大学;2003年
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6 贺启贵;门脉高压性胃病病理初步分析[D];山西医科大学;2003年
7 赵书民;乙型肝炎病毒pres_2-s基因(ayw亚型)转基因小鼠的建立[D];第二军医大学;2002年
8 杨淑丽;孕妇乙型肝炎病毒(HBV)携带者及其胎儿组织和细胞HBV标志物检测及意义[D];第三军医大学;2003年
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10 张伟;乙型肝炎病毒前S区不同片段的克隆、鉴定及与PreS1基因相互作用蛋白在酵母双杂交系统中的筛选[D];第四军医大学;2002年
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1 李明明;现代疫苗有啥作用[N];医药养生保健报;2007年
2 山东省农科院 秦卓明 王友令;采用的疫苗一定要种属专用[N];中国畜牧兽医报;2007年
3 穆车;卫生部:脊灰减毒活疫苗安全有效[N];大众科技报;2006年
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5 北京生物制品研究所研究员 卫生部免疫规划专家委员会委员 迮文远;我国脊灰糖丸很安全[N];健康报;2007年
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8 本报记者  刘景峰;『糖丸』并不总是『甜』的[N];医药经济报;2006年
9 向文;脊灰减毒活疫苗安全有效[N];科技日报;2006年
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