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侧耳属菌株分子分类和分子系统发育关系研究

马富英  
【摘要】: 侧耳属是一类广为分布的木腐生真,种类较多,分类较为混乱。近年来,随着科学技术的发展,许多分子生物学技术已广泛用于蕈菌的分类和系统发育研究中。本文在传统的形态分类鉴定基础上,采用基因组DNA的RAPD分析和核rDNA特异性扩增片段的限制性酶切分析,以亚侧耳属、蘑菇属和香菇属为参照,研究侧耳属18个既定种和一些未定名的种共52个菌株的分类和系统发育关系。这项研究的目的旨在寻找一些快速、准确、有效的分子生物学方法对侧耳进行分类鉴定。 现将研究结果报告如下: 1.形态特征研究表明,鲍鱼菇和囊盖侧耳,红平菇和桃红侧耳、凤尾菇和肺形侧耳分别是一个种的两个不同名称。其它一些未定名的侧耳,另有2株佛罗里达侧耳。 2.供试菌株随机扩增DNA多态性研究表明,RAPD技术不仅可有效地用于侧耳种内不同菌株的区分,而且可用于不同种的分类鉴定。 3.随机扩增多态性DNA的聚类分析表明,在76%相似水平下,可将供试的侧耳菌株聚成九大类,第一大类包括糙皮侧耳、佛罗里达侧耳;第二大类包括美味侧耳、灰白侧耳、剌芹侧耳;第三大类包括哥伦比亚侧耳、裂皮侧耳、黄白侧耳、阿魏蘑、白阿魏蘑;第四大类包括肺形侧耳和凤尾菇;第五大类为3株未定名的侧耳;第六大类仅有具核侧耳;第七大类为金顶侧耳;第八大类包括红平菇和桃红侧耳;第九大类包括鲍鱼菇和囊盖侧耳。 4.rDNA的特异性扩增结果表明,供试侧耳菌株均可扩增出一条约1.46kb的28SrDNA 5’端特异性片段和一条约680bp的ITS片段,表明这两个区域在侧耳属中较为保守,没有发生长度突变。而IGS1区域在供试侧耳菌株中发生了长度变异,红平菇和和桃红侧耳IGS1长度约1.1kb,其它侧耳均为1.0kb。另外,28SrDNA5’端长度在四个供试属中相同,ITS和IGS1则不完全相同。香菇和孢蘑菇的ITS和IGS1区域长度相同,分别为720bp和1.3kb。亚侧耳在这两个区域的长度则与其它供试菌株均不相同。 5.28S rDNA 5’端扩增产物的酶切分析表明,所有供试侧耳菌株无AluⅠ酶切多态性,BamlHⅠ可将金顶侧耳与其它供试侧耳分开,Taq Ⅰ可将鲍鱼菇和囊盖侧耳与侧耳其它供试侧耳菌株区分开,而鲍鱼菇和囊盖侧耳则不能分开,MspⅠ酶切多态性最强,可将供试侧耳分为8种基因型,Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ和Hha Ⅰ次之,分别可将供试侧耳分为5种、5种和4种基因型。28S rDNA 5’端PCR—RFLP聚类分析结果表明,在92%的相似系数下,可将52个侧耳菌株分为五类:Ⅰ红平菇和桃红平菇;Ⅱ鲍鱼菇和囊盖侧耳:Ⅲ具核侧耳;Ⅳ金顶侧耳;Ⅴ其它供试侧耳。 6.[TS扩增产物的限制性酶切分析结果表明,召tIl),Hl对所有供试菌株均无酶切位 点,而另外6利,供试内切酶(Alul、Hae Itl、llllal、11infl、九式斗,I、Tcl叮I)都能 将金顶侧耳与其它侧耳菌株区分开。ITS PCR一RFLP聚类分析结果表明,52个侧耳 菌株在93%的相似系数水平可分为七类,第一类包括糙皮侧耳、佛罗以达侧耳、美味 侧耳、裂皮侧耳、黄白侧耳、哥伦比亚侧耳、灰自侧耳、阿魏蘑、白阿魏蘑;第二类为 刺芹侧耳;第三类包括月!Ij形侧耳和凤尾菇;第四类为具核侧耳;第:ti1类有鲍鱼菇和囊盖 侧耳;第六类包括红平菇和桃红侧耳;第七类为金顶侧耳。 7.IGSI如’‘增产物的酶切分析表明,Bcln,H!对所有供试菌株l1’S区无酶切位点, 抢ql能将金项侧一耳、鲍鱼菇和交盖侧耳与其它侧一耳分开,但它们不能彼此分开。刀lu !、I1cl。川、Hillf!、八试勺,1均能将具核侧耳、余顶侧耳、红平菇和桃红侧耳、鲍有I.菇 和囊盖侧耳区分开。IGSI PCR一RFLP聚类分析结果表明,在93%相似系数水平,供 试侧耳菌株可明显地分为六大类:第一大类山糙皮侧一耳、美味侧一耳、黄自侧Jl.、哥伦比 亚侧耳、阿魏蘑、白阿魏蘑、佛罗里达侧耳、月巾形侧耳、风尾菇、裂皮侧耳组成;第二 大类有刺芹侧耳;第三大类仅有金顶侧耳;第四人类包括鲍负菇和囊盖侧耳;第五大类 只有具核侧吓;第六人类包括红_,1之菇和桃红侧L}二。 8.建立在285:DNAS’端、ITs和IGsl扩增户:物限制性酶切分析的聚类分析图表l刃, 供试侧耳菌株在94%的相似水平,可分为五大类:具核侧耳、红平菇和桃红侧耳、余顶 侧耳、鲍鱼菇和囊盖侧耳各代表一类,其它侧工!:菌株聚在一大类。 综上所述,木文采用RAPD和:DNA PCR一RFLP技术,较系统地研究了18种侧耳 的分类和系统发育关系。结果表明其它三个属可与侧耳属分开。余顶侧耳、红平菇和桃 幻侧耳、鲍鱼菇和囊盖侧耳等与其它侧耳的亲缘关系较远,这一结果与形态分类鉴定结 果基本一致。红.平菇和桃红侧耳,鲍鱼菇和囊盖侧耳,肺形侧耳和凤尾菇,分别是同一 个种的两个名称,即桃红侧耳应为红j卜菇,鲍鱼菇应为囊盖侧上1:,风尾菇应为)11卜形侧耳。 rDN八PCR一RFLP更稳定,更适合侧耳属分类和系统发育关系。这些研究结果极大地丰 富了侧耳属的分类学、系统学、遗传学和分子生物学内容,从而有利于侧耳属种质资源 的保打”、Jl几发不!!利)!j。


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