H_9N_2亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡的病理学研究

【摘要】：4周龄健康海兰灰蛋鸡100羽随机分成两组：试验组50羽，对照组50羽。试验组经滴鼻-点眼的方式接种H_9N_2亚型禽流感病毒尿囊液0.4ml／羽(含毒量为10~7-10~9EID_(50))，复制禽流感病理模型。对所建立的病理模型进行临床症状、病理组织学变化的检查，在接种后1d、3d、7d、14d、21d测定感染蛋鸡血清生化指标的变化，用微量平板红细胞凝集抑制试验(HI试验)测定不同日龄鸡抗体水平的变化，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(简称TUNEL)法对感染蛋鸡脾脏、胸腺、法氏囊、盲肠扁桃体进行细胞凋亡的动态变化研究。 临床症状为：接种后第3天，感染蛋鸡精神萎靡，食欲下降，饮水量增加。剖检可见，感染蛋鸡肝脏肿大、出血、淤血，密布针尖大小灰白色或灰黄色坏死灶；肾脏肿大，淤血；肠道粘膜水肿、出血。 分批剖杀接种蛋鸡，组织学检查结果表明：该病毒可引起多种组织细胞出现变性、坏死，尤以肝脏、肾脏的损害最重，且在不同时间内其损伤程度不同。肝：出血、淤血，肝细胞变性、坏死。肾：轻度淤血，肾小管上皮细胞发生严重变性、坏死。心脏：心肌出血、变性。肠道：粘膜上皮细胞变性、坏死，脱落。肺：出血。气管：粘膜层脱落，内有浆液性渗出物。脾、胸腺、法氏囊：淋巴细胞大量减少，部分细胞发生变性、坏死。肝和肾组织进行Mann亚甲蓝伊红染色表明胞质内有嗜酸性包涵体。 电镜观察结果表明：感染蛋鸡胸腺、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体等免疫器官部分细胞出现细胞凋亡的形态学特征，细胞染色质固缩并凝结成块，聚集在核膜周边呈新月状或环状小体。肝、肾组织多数细胞发生坏死，血管内皮细胞发生肿胀、变形。 血清生化指标测定结果表明：接种后第3天，血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST／GOT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT／GPT)、磷(P)含量升高。钙(Ca)含量在接种后第7天下降。总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿酸(UA)和肌酐(CRE)、胆碱酯酶(ChE)无明显变化。 HgNZ亚型禽流感病毒人工感染蛋鸡的病理学研究 感染蛋鸡Hl抗体水平测一定结果表明:鸡接种后第3天检测出H工 抗体，随后持续升高，14天升至最高值1:256，21天下降到1:64。 免疫器官细胞凋亡研究结果表明:感染蛋鸡脾脏、胸腺、法氏囊的 细胞凋亡率升高，表明禽流感病毒感染诱导了免疫器官的细胞凋亡。 由此作者认为，在蛋鸡感染禽流感病毒的发生发展过程中，病毒通 过呼吸道等途径侵入动物机体，随血液循环到达体内特定部位增殖。血 管内皮细胞发生变性、坏死和脱落，造成微循环障碍。肝肾组织变性坏 死较严重，免疫器官细胞凋亡率显著升高。另一方面，机体的抗体水平 升高。这些表明禽流感病毒在使机体致病的同时，也刺激机体的免疫应 答。