木耳的极性研究

【摘要】：利用原生质体单核化技术分别获得两个木耳(Auricularia auricula(L.ex Hook)Underw]栽培菌株He-1和Ju-1的单核体H_2和J_3，H_2和J_3配对杂交形成双核体菌株H_2J_3。H_2J_3经栽培出耳后，收获其子实体，通过单孢分离技术获得F1子代126个单核体。 分别用Hoechst33258、DAPI和Calcofluor white M2R对木耳菌丝的细胞核和隔膜荧光染色，研究了缓冲液种类、缓冲液浓度、染色时间、菌龄等因素对染色效果的影响，确定了木耳菌丝最佳的细胞核和隔膜双重荧光染色条件：样品首先经50ug／ml的Hoechst33258染色4分钟，后用蒸馏水冲洗，再用2.5 ug／ml的Calcofluor white M2R染色1分钟。 将60个F_1子代单核体两两配对，采用Hoechst33258和Calcofluor white M2R对配对菌丝进行细胞核和隔膜的双重荧光染色，在荧光显微镜下观察核相，并结合普通光学显微镜下观察锁状联合，鉴别菌丝交配反应是否形成双核体菌丝，统计其形成双核菌丝的数量，并经矫正卡平方检验，结果表明木耳属单因子交配系统。同时根据两个亲本单核体交配型，测定了供试的60个子代单核体的交配型。 随机挑选20个单核体和10个交配亲和形成的双核体进行出耳结实试验。结果表明所有供试双核体均能正常结实，而20个供试单核体中只有4个单核体能非正常结实。 综合极性测定试验和结实试验的结果，本研究结果认为木耳属于单因子控制的二极性异宗结合担子菌。