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柚类种质资源超低温保存体系研究初探

徐定华  
【摘要】:植物种质资源的传统保存形式以田间种植为主,但是其容易受到自然气候、空间限制和管理经费短缺等因素的影响,使其应用于种质资源的长期保存受到限制。近年来基于组织培养技术发展起来的液氮超低温保存技术以其保存稳定、效率高、花费少等优点而被认为是目前植物资源长期保存的理想方法。本研究我们以鄂西地区特有柚类种质为试材,进行了玻璃化法超低温保存研究,以期建立起其长期、稳定的保存体系,为柚类资源和其他果树品种的长期保存提供技术借鉴,所取得的主要结果如下: 1.对柚成年态茎段的离体培养进行了研究。依据真菌孢子的萌发特点及不同生长时期对消毒剂敏感性不同的特性,以8月份左右的柚成年态茎段为试材,试验建立了一种有效的获得无菌外植体方法,即将3~4cm长柚茎段用70%酒精消毒30s,0.1%升汞溶液处理20min,材料放置2d后,相同浓度升汞溶液第二次处理20min。无菌水冲洗后,将材料切成0.5cm长带一腋芽茎段,接种至初代培养基。以这种方法消毒,外植体的污染率大大降低,获得了85.6%的成功率。对柚腋芽诱导培养基进行了筛选,结果表明茎段腋芽诱导最佳培养基配方是:MT+BA 2.0mg/L+GA_30.5mg/L+NAA0.1mg/L+葡萄糖30g/L。待新梢长到1.0~1.5cm长时即进行继代培养,生长正常,其中没有观察到愈伤化现象。 2.对柚茎尖玻璃化法超低温保存的基本条件进行了研究,初步建立起柚类茎尖的玻璃化法超低温保存体系。试验以高浓度的蔗糖作为渗透性保护物质,以景阳白柚为试材进行预培养。结果表明,蔗糖的预培养方式以0.3M(1d)+0.5M(1d)+0.7M(1d)最好,保存成活率达81.4%;对玻璃化液(PVS_2)的脱水时间和温度进行了研究,宜昌本地柚4号的处理结果表明其在0℃下脱水20min,可以取得72.2%的保存存活率,显著高于20℃下的处理;对4个柚品种的茎尖大小对保存成活率的影响进行了研究,结果以大小为2.0~2.5mm的茎尖平均存活率要高于另外二者(1.0~1.5mm,3.0~3.5mm),为60.6%。再生植株的生根有效培养基配方是:1/2MT+NAA0.5mg/L+Suc40g/L,生根率达到90.6%。


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