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完全甜柿及部分雄性种质间的亲缘关系研究

张青林  
【摘要】:中国柿(Diospyros kaki Thunb.)在长期栽培过程中,由于遗传变异和自然、人工选择的作用,分化出了许多宝贵的甜柿资源。本研究对部分柿属雄性种质及甜柿种质采用RAPD、ISSR等分子标记分析,结合对新发现原产中国大别山区雄性种质花粉基础生物学研究,建立和优化柿属植物ITS-PCR及AFLP技术体系,对部分柿属雄性种质间亲缘关系、系统演化及遗传多样性进行了分析比较,探讨柿属雄性种质在中国原产甜柿起源演化中可能的作用。主要结果如下: 1.12份供试雄性种质花粉萌芽率在20.1%—38.5%之间;除台湾正柿及油柿外,其余试材的花粉均能在罗田甜柿的柱头上萌发;雄株2号、雄株3号、雄株8号不含巨大花粉,其余试材有0.18%—4.44%不同比例的巨大花粉存在。 2.对29份柿属雄性种质RAPD分析结果如下:从118条随机引物中筛选得到32条引物,共扩增得到499条谱带,平均多态性比率87.17%,26个种质特异性标记,平均多态性信息含量为0.6097。3种方法(UPGMA法,ME法,Wagner简约法)聚类分析表明:中国柿种质与日本柿种质明显聚为2个类群,甜柿与涩柿不能截然分开;完全雄性资源同罗田甜柿亲缘关系密切;湘西甜柿和日本甜柿关系密切,宝盖甜柿和磨盘柿(罗田)亲缘关系密切;3种聚类方法结果基本聚类分组结果类似,同时也存在极少数差异;主成分分析和主坐标分析支持聚类分析结果。 3.建立了适合柿属植物的ISSR分析技术体系:25μL反应体系中,含1×Buffer,Mg~(2+)2.0或2.5mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶1U,甲酰胺2%,模板DNA 2.4ng/μL;PCR扩增程序:94℃变性3min;94℃ 30s,(Tm+2)℃(根据引物不同设定)45s,72℃ 1.5min,35个循环;72℃延伸7min;2%琼脂糖电泳分离PCR产物。对52份柿属雄性种质ISSR分析结果如下:从58条ISSR引物中筛选得到20条随机引物,共扩增得到274条谱带,平均多态性比率92.33%,30个种质特异性标记,平均多态性信息含量为0.7119。3种方法聚类分析结果表明中国柿种质、日本柿种质可以分成不同的3-5组,甜柿与涩柿虽不能截然分开,但甜、涩柿种质基本可以分为不同的组,仅有2个完全甜柿种质分在涩柿1组中;3个韩国涩柿品种和中国涩柿品种亲缘关系密切,分组结果和地理起源较为一致;完全雄性种质和罗田甜柿亲缘关系密切,宝盖甜柿


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